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DON毒素的制備純化方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-22
  • 技術(shù)成熟度:詳情咨詢
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過(guò)戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201010226055.6 
  • 技術(shù)(專利)名稱 DON毒素的制備純化方法 
  • 項(xiàng)目單位 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
  • 發(fā)明人 徐劍宏,史建榮,祭芳,林凡云 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學(xué)藥品
  • 技術(shù)成熟度 詳情咨詢
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 褚辰
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-12-22  
  • 01

    項(xiàng)目簡(jiǎn)介

    本發(fā)明涉及一種DON毒素的制備純化方法,是利用禾谷鐮刀菌生產(chǎn)DON毒素,生產(chǎn)中使用的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基均為液體培養(yǎng)基,其中,種子培養(yǎng)基由下列組分按照體積百分比混合:蔗糖1%,硝酸銨0.2%,硫酸鎂0.05%,硫酸鐵0.02%,磷酸二氫鉀0.2%,蛋白胨0.4%,酵母浸膏0.2%,余量為水;所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是由下列組分按照體積百分比混合:硝酸銨0.1%,磷酸二氫鉀0.3%,硫酸鎂0.05%,氯化鈉0.4%,蔗糖2%,甘油1%,硫酸鋅0.002%,余量為水;具體制備純化方法是通過(guò)活化、培養(yǎng)、發(fā)酵、純化等步驟獲得純化的DON毒素。
    展開(kāi)
  • 02

    說(shuō)明書

    1.一種DON毒素的制備純化方法,是利用禾谷鐮刀菌生產(chǎn)DON毒素,其特征在
    于:生產(chǎn)中使用的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基均為液體培養(yǎng)基,其中,種子培養(yǎng)基由下
    列組分按照體積百分比混合:蔗糖1%,硝酸銨0.2%,硫酸鎂0.05%,硫酸鐵0.02%,
    磷酸二氫鉀0.2%,蛋白胨0.4%,酵母浸膏0.2%,余量為水;所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是
    由下列組分按照體積百分比混合:硝酸銨0.1%,磷酸二氫鉀0.3%,硫酸鎂0.05%,氯
    化鈉0.4%,蔗糖2%,甘油1%,硫酸鋅0.002%,余量為水;具體制備純化方法是:
    a)將谷鐮刀菌經(jīng)活化,接種于種子培養(yǎng)基中,25~28℃,搖床黑暗培養(yǎng)3天,獲
    得種子液;
    b)將種子液按5%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中,25~28℃,搖瓶或發(fā)酵罐黑暗培
    養(yǎng)15~20天,獲得發(fā)酵培養(yǎng)液;
    c)將發(fā)酵培養(yǎng)液離心后取上清,用乙酸乙酯萃取,將萃取所得的乙酸乙酯濃縮,
    得DON毒素的粗提取液;
    d)將DON毒素粗提取液旋轉(zhuǎn)蒸干后,用環(huán)己烷與乙酸乙酯混合溶液溶解,過(guò)
    60-100目的柱層析硅膠柱,依次分別用不同配比的環(huán)己烷與乙酸乙酯混合洗脫液洗脫,
    用TLC方法檢測(cè)每管洗脫液中含有DON毒素的情況;
    e)選擇含有DON毒素的幾管洗脫液旋轉(zhuǎn)濃縮后,再過(guò)60-100目的柱層析硅膠柱,
    依次分別用不同配比的環(huán)己烷與乙酸乙酯混合洗脫液洗脫,用TLC方法檢測(cè)每管洗脫
    液中含有DON毒素的情況;
    f)選擇只含有DON毒素的幾管進(jìn)行合并后旋轉(zhuǎn)蒸干,溶于少量的甲醇中,4℃條
    件下形成第一次結(jié)晶;
    g)把第一次結(jié)晶重新溶解于甲醇中,4℃條件下進(jìn)行二次結(jié)晶,獲得純化的DON
    毒素;
    在d步驟中,所述的環(huán)己烷與乙酸乙酯混合溶液中,環(huán)己烷與乙酸乙酯的體積比
    為5∶1,所述的不同配比的環(huán)己烷與乙酸乙酯混合洗脫液是指:環(huán)己烷與乙酸乙酯的體
    積比分別為5∶1、8∶3、5∶3、1∶1、3∶5和1∶5;在e步驟中,所述的不同配比的環(huán)己烷與
    乙酸乙酯混合洗脫液是指:環(huán)己烷與乙酸乙酯的體積比分別為8∶3、5∶3、1∶1、3∶5和
    1∶5;在d步驟和e步驟中,環(huán)己烷與乙酸乙酯混合洗脫液的使用順序均為:環(huán)己烷的
    比例由大到小逐級(jí)遞減。
    2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DON毒素結(jié)晶的制備純化方法,其特征在于:d步驟和
    e步驟中所述的用TLC方法檢測(cè)每管洗脫液中含有DON毒素的情況是指:在收集不
    同比例洗脫液的樣品后,把每管樣品進(jìn)行旋轉(zhuǎn)濃縮,再用TLC方法檢測(cè)每管洗脫液中
    含有DON毒素的情況。
    展開(kāi)

專利技術(shù)附圖

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    專利證書

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