本發(fā)明涉及一種DON毒素的制備純化方法，是利用禾谷鐮刀菌生產(chǎn)DON毒素，生產(chǎn)中使用的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基均為液體培養(yǎng)基，其中，種子培養(yǎng)基由下列組分按照體積百分比混合：蔗糖1％，硝酸銨0.2％，硫酸鎂0.05％，硫酸鐵0.02％，磷酸二氫鉀0.2％，蛋白胨0.4％，酵母浸膏0.2％，余量為水；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是由下列組分按照體積百分比混合：硝酸銨0.1％，磷酸二氫鉀0.3％，硫酸鎂0.05％，氯化鈉0.4％，蔗糖2％，甘油1％，硫酸鋅0.002％，余量為水；具體制備純化方法是通過(guò)活化、培養(yǎng)、發(fā)酵、純化等步驟獲得純化的DON毒素。

1.一種DON毒素的制備純化方法，是利用禾谷鐮刀菌生產(chǎn)DON毒素，其特征在
于：生產(chǎn)中使用的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基均為液體培養(yǎng)基，其中，種子培養(yǎng)基由下
列組分按照體積百分比混合：蔗糖1％，硝酸銨0.2％，硫酸鎂0.05％，硫酸鐵0.02％，
磷酸二氫鉀0.2％，蛋白胨0.4％，酵母浸膏0.2％，余量為水；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是
由下列組分按照體積百分比混合：硝酸銨0.1％，磷酸二氫鉀0.3％，硫酸鎂0.05％，氯
化鈉0.4％，蔗糖2％，甘油1％，硫酸鋅0.002％，余量為水；具體制備純化方法是：
a)將谷鐮刀菌經(jīng)活化，接種于種子培養(yǎng)基中，25～28℃，搖床黑暗培養(yǎng)3天，獲
得種子液；
b)將種子液按5％的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，25～28℃，搖瓶或發(fā)酵罐黑暗培
養(yǎng)15～20天，獲得發(fā)酵培養(yǎng)液；
c)將發(fā)酵培養(yǎng)液離心后取上清，用乙酸乙酯萃取，將萃取所得的乙酸乙酯濃縮，
得DON毒素的粗提取液；
d)將DON毒素粗提取液旋轉(zhuǎn)蒸干后，用環(huán)己烷與乙酸乙酯混合溶液溶解，過(guò)
60-100目的柱層析硅膠柱，依次分別用不同配比的環(huán)己烷與乙酸乙酯混合洗脫液洗脫，
用TLC方法檢測(cè)每管洗脫液中含有DON毒素的情況；
e)選擇含有DON毒素的幾管洗脫液旋轉(zhuǎn)濃縮后，再過(guò)60-100目的柱層析硅膠柱，
依次分別用不同配比的環(huán)己烷與乙酸乙酯混合洗脫液洗脫，用TLC方法檢測(cè)每管洗脫
液中含有DON毒素的情況；
f)選擇只含有DON毒素的幾管進(jìn)行合并后旋轉(zhuǎn)蒸干，溶于少量的甲醇中，4℃條
件下形成第一次結(jié)晶；
g)把第一次結(jié)晶重新溶解于甲醇中，4℃條件下進(jìn)行二次結(jié)晶，獲得純化的DON
毒素；
在d步驟中，所述的環(huán)己烷與乙酸乙酯混合溶液中，環(huán)己烷與乙酸乙酯的體積比
為5∶1，所述的不同配比的環(huán)己烷與乙酸乙酯混合洗脫液是指：環(huán)己烷與乙酸乙酯的體
積比分別為5∶1、8∶3、5∶3、1∶1、3∶5和1∶5；在e步驟中，所述的不同配比的環(huán)己烷與
乙酸乙酯混合洗脫液是指：環(huán)己烷與乙酸乙酯的體積比分別為8∶3、5∶3、1∶1、3∶5和
1∶5；在d步驟和e步驟中，環(huán)己烷與乙酸乙酯混合洗脫液的使用順序均為：環(huán)己烷的
比例由大到小逐級(jí)遞減。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DON毒素結(jié)晶的制備純化方法，其特征在于：d步驟和
e步驟中所述的用TLC方法檢測(cè)每管洗脫液中含有DON毒素的情況是指：在收集不
同比例洗脫液的樣品后，把每管樣品進(jìn)行旋轉(zhuǎn)濃縮，再用TLC方法檢測(cè)每管洗脫液中
含有DON毒素的情況。