本發明是應用新興分子生物學技術之一的Real-time PCR對動物源性嗜衣原體(Chlamydophilapsittaci、C.abortus、C.caviae、C.pecorum、C.felis)實施的快速檢測與診斷方法。本檢測體系采用以動物源性嗜衣原體的16S rRNA的保守區域為基礎設計了一對引物及相應的TaqMan探針。該體系能對來自動物的糞便和泄殖腔的棉拭子及人的氣管洗脫液中存在的動物源性嗜衣原體基因進行檢測，并且檢測敏感度比普通的PCR高出10倍。Real-time PCR具有無需進行后PCR的處理，可避免因進行瓊脂糖凝膠電泳而可能造成的交叉污染，從而提高檢測的準確率和可信度。

1.一種建立TaqMan?probe實時熒光定量PCR檢測體系的方法，以動物源性嗜衣原體的16S?rRNA為靶基因，包括標準菌株的培養和DNA的分離純化、TaqManprobe檢測體系的確立，TaqMan?probe檢測體系的檢測步驟；所述標準菌株的培養步驟是選用動物衣原體和嗜衣原體的標準菌株用HeLa229和Hep-2細胞進行培養，培養后使用Puregene?DNA分離純化試劑盒Funakoshi，Japan，從沒感染力的衣原體EB中分離純化基因組DNA；TaqMan?probe檢測體系的確立步驟包括：(1)根據鸚鵡熱嗜衣原體C.psittaci?6BC的16S?rRNA?Accession?No.AB001778片段序列，利用Primer?express.2.0設計如下序列的引物和探針：AC89F16S：5’-GGCGGAAGGGTTAGTAATACATAGATAA-3’AP218R16S：5’-AAGGTCCGAAGATCCCCTTCT-3’；Probe：5’(FAM)-CCGCTAATACCGAATGTGGTATGTTTAGGC-(TAMRA)3’；(2)TaqMan?probe?real-time?PCR檢測體系的建立的實時熒光定量PCR反應均由7500real-time?PCR儀實施完成，包括反應體系、反應條件，反應體系是經過對上下游引物和探針的濃度優化后確定為25μl反應體系；反應條件是由引物和探針的Tm值確立并對其進行優化。2.如權利要求1所述的方法，其特征在于TaqMan?probe?real-time?PCR檢測體系的檢測,包括檢測體系的特異性試驗、敏感性試驗，同時將該兩試驗與一步法PCR檢測體系進行比較；特異性試驗是將10pg從動物源性嗜衣原體的沒有感染力的EB中分離純化的DNA加入實時熒光定量PCR反應體系中進行檢測，同時以同量的其他衣原體和相關菌株的DNA作為對照，得到擴增曲線圖，以確定其檢測特異性；敏感性試驗是將計算得到的標準菌株C.psittaci?NJ-1的濃度作梯度稀釋，以Ct值＜38個循環為下限檢測該體系的靈敏性。?