本發(fā)明公開了一種雄甾?1,4?二烯?3,17?二酮的制備方法，其包括如下步驟：(1)向發(fā)酵培養(yǎng)基中接種分枝桿菌，發(fā)酵獲得發(fā)酵液；(2)向發(fā)酵液中加入乙醇，破碎處理后，固液分離取上清液，將上清液過強(qiáng)堿陰離子交換樹脂的色譜柱，收集流出液，得到流出液I；(3)將流出液I上樣至骨架為苯乙烯?二乙烯苯的大孔吸附樹脂，使用甲醇溶液洗脫，得洗脫液II，濃縮結(jié)晶，再以有機(jī)溶劑溶解后重結(jié)晶，即得雄甾?1,4?二烯?3,17?二酮純品，所述的有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丁脂和丙酮中的任一種。所述的方法全面改進(jìn)了ADD的發(fā)酵提取工藝使發(fā)酵產(chǎn)物損失少，使用的有機(jī)溶劑較少，更加環(huán)保。

1.一種雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟：(1)向發(fā)酵培養(yǎng)基中接種分枝桿菌，所述分枝桿菌為Mycobaterium fortuituunsubsp.ATCC 35856，發(fā)酵獲得發(fā)酵液，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下的組成成分：20～40g/L植物甾醇、0.5～3g/L有機(jī)酸、0.5～3g/L無機(jī)氮源、5～20g/L有機(jī)碳源、35～50g/L有機(jī)氮源、1～3g/L無機(jī)鹽A、0.1～0.5g/L無機(jī)鹽B、0.002～0.006g/L微量元素和2～4g/L助溶劑，所述的有機(jī)酸選自乙酸、丙酸、酒石酸和檸檬酸中的一種或多種，所述的無機(jī)氮源選自硫酸銨、硝酸銨、氯化銨和硝酸鈉中的一種或多種，所述的有機(jī)碳源選自葡萄糖、麥芽糖、果糖、甘油和甘露醇中的一種或多種，所述的有機(jī)氮源選自黃豆粉、花生粉、羽毛粉和棉籽粉中的一種或多種，所述的無機(jī)鹽A選自磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉中的一種或多種，所述的無機(jī)鹽B選自硫酸鎂、硫酸鈉和硫酸鉀中的一種或多種，所述的微量元素選自硫酸亞鐵、硫酸鋅、氯化錳中的一種或多種，所述的助溶劑選自吐溫20、吐溫80、乙醇和卵磷脂中的一種或多種；(2)向步驟(1)獲得的發(fā)酵液中加入乙醇，破碎處理后，固液分離取上清液，將上清液過強(qiáng)堿陰離子交換樹脂的色譜柱，收集流出液，得到流出液I；所述的強(qiáng)堿陰離子交換樹脂為江蘇蘇青水處理工程集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的牌號(hào)為SQD-706的強(qiáng)堿陰離子交換樹脂；(3)將步驟(2)所得的流出液I上樣至骨架為苯乙烯-二乙烯苯的大孔吸附樹脂，所述的骨架為苯乙烯-二乙烯苯的大孔吸附樹脂為上海華震科技有限公司生產(chǎn)的牌號(hào)為HZ-20SS的大孔吸附樹脂；使用甲醇溶液洗脫，得洗脫液II，將所述洗脫液II濃縮結(jié)晶，再以有機(jī)溶劑溶解后重結(jié)晶，即得雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮純品，所述的有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丁脂和丙酮中的任一種。2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下的組成成分：30～35g/L植物甾醇、1.5～2.5g/L有機(jī)酸、1～2g/L無機(jī)氮源、8～15g/L有機(jī)碳源、40～45g/L有機(jī)氮源、1.5～2.5g/L無機(jī)鹽A、0.2～0.5g/L無機(jī)鹽B、0.002～0.003g/L微量元素和2.5～3.5g/L助溶劑；所述發(fā)酵的溫度為28～32℃；所述發(fā)酵的時(shí)間為48～96小時(shí)；所述發(fā)酵的溶氧量為30～80％；所述的分枝桿菌接種的種齡為40～50小時(shí)；和/或，所述分枝桿菌的接種量為3～6％，所述百分比為接種的種子液占發(fā)酵培養(yǎng)基的體積百分比。3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下的組成成分：33g/L植物甾醇、2g/L有機(jī)酸、1.5g/L無機(jī)氮源、10g/L有機(jī)碳源、40g/L有機(jī)氮源、2g/L無機(jī)鹽A、0.3g/L無機(jī)鹽B、0.006g/L微量元素和3g/L助溶劑；所述發(fā)酵的溫度為30℃；所述發(fā)酵的時(shí)間為72～96小時(shí)；所述發(fā)酵的溶氧量為50～60％；所述的分枝桿菌接種的種齡為48小時(shí)；和/或，所述接種的接種量為5％，所述百分比為接種的種子液占發(fā)酵培養(yǎng)基的體積百分比。4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的有機(jī)酸為檸檬酸；所述的無機(jī)氮源為硫酸銨；所述的有機(jī)碳源為葡萄糖；所述的有機(jī)氮源為黃豆粉；所述的無機(jī)鹽A為磷酸二氫鈉；所述的無機(jī)鹽B為硫酸鎂；所述的微量元素為氯化錳和硫酸亞鐵；和/或，所述的助溶劑為吐溫80。5.如權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基還包括0.5～2.5g/L氨基酸；所述的氨基酸為選自谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸和蘇氨酸中的一種或多種。6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基還包括1.0～2.0g/L氨基酸。7.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的氨基酸為谷氨酸。8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的乙醇為體積百分?jǐn)?shù)為85～100％的乙醇；所述乙醇的添加量為所述發(fā)酵液體積的1～3倍；所述的破碎處理的方法為超聲或浸泡于所述乙醇后攪拌；所述超聲的時(shí)間為10～60min分鐘；所述上清液過色譜柱的流速為0.5～2mL/min；和/或，所述的強(qiáng)堿陰離子交換樹脂所帶的基團(tuán)為季銨堿基團(tuán)。9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述的破碎處理的方法為超聲。10.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的乙醇為體積百分?jǐn)?shù)為95％的乙醇；所述超聲的時(shí)間為30min；所述上清液過色譜柱的流速為1～1.5mL/min。11.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的濃縮為利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行濃縮；和/或，所述的骨架為苯乙烯-二乙烯苯的大孔吸附樹脂還滿足下列要求：孔容1.22～2.36ml/g，比表面積350～850m²/g，含水量58～68％，濕真密度1.00～1.10g/mL，濕視密度0.60～0.75g/mL。