本發(fā)明公開了可用于對小RNA進(jìn)行表達(dá)分析的一種小RNA的定量檢測方法和試劑盒，該方法通過bulge loop RT引物將小RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，加入PCR正向引物和PCR通用反向引物進(jìn)行定量PCR擴(kuò)增。本發(fā)明所述的小RNA的定量檢測方法和試劑盒具有靈敏度高，特異性好和試劑盒價廉等優(yōu)點(diǎn)，且可用于批量檢測。

1.一種小RNA的定量檢測方法，其特征是，包括以下步驟：
(1)bulge?loop?RT引物將小RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，所述bulge?loop?RT引物具有40
-60個核苷酸，從5’端至3‘端有分別為莖1部分，bulge部分，莖2部分，
環(huán)部分，莖3部分及延伸部分；莖3部分與莖1和莖2部分互補(bǔ)配對，延伸部分
能與小RNA互補(bǔ)配對；
(2)加入PCR正向引物和PCR通用反向引物進(jìn)行定量PCR擴(kuò)增，正向PCR引物為具有
20-40個核苷酸序列，從5’端至3‘端分別為延伸部分和小RNA相似部分；小
RNA相似部分為小RNA的cDNA的互補(bǔ)序列的一部分，其長度與bulge?loop?RT引
物延伸部分的長度之和要大于或等于小RNA的全長；PCR反向通用引物長度為具
有20-40個核苷酸的序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小RNA的定量檢測方法，其特征是，所述PCR反向引物和/或
所述bulge?loop?RT引物的延伸部分具有LNA或甲基化修飾。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的小RNA的定量檢測方法，其特征是，所述莖3部分與莖1
和莖2部分互補(bǔ)配對長度為6-12堿基對；所述延伸部分的長度為3-12個堿基；所述正向PCR
引物為28-32個堿基。
4.一種小RNA定量檢測試劑盒，其特征是，主要包括有：
(A)具有40-60個核苷酸的bulge?loop?RT引物，從5’端至3‘端分別為莖1部
分，bulge部分，莖2部分，環(huán)部分，莖3部分及延伸部分；莖3部分與莖1
和莖2部分互補(bǔ)配對，延伸部分能與小RNA互補(bǔ)配對；
(B)具有20-40個核苷酸的正向PCR引物，從5’端至3‘端分別為延伸部分，小
RNA相似部分，小RNA相似部分的長度與bulge?loop?RT引物延伸部分的長度
之和大于或等于小RNA的全長；小RNA相似部分為小RNA的cDNA的互補(bǔ)序列
的一部分；和
有具有20-40個核苷酸的PCR反向通用引物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的小RNA的定量檢測試劑盒，其特征是，所述bulge?loop?RT引
物是堿基組成為SEQ.NO：1、正向PCR引物的堿基組成為SEQ.NO：3；或所述bulge?loop?RT引
物是堿基組成為SEQ.NO：2的序列、正向PCR引物的堿基組成為SEQ.NO：4；或所述bulge?loop
RT引物是堿基組成為SEQ.NO：6的序列、正向PCR引物的堿基組成為SEQ.NO：7。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的小RNA的定量檢測試劑盒，其特征是，所述PCR反向通用引物
為SEQ.NO：5。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的小RNA的定量檢測試劑盒，其特征是，所述bulge?loop?RT引
物的延伸部分3’端進(jìn)行LNA或甲基化修飾。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的小RNA的定量檢測試劑盒，其特征是，所述PCR反向引物5’
或3’端進(jìn)行LNA修飾或甲基化修飾。
9.根據(jù)權(quán)利要求4-8任一項(xiàng)所述的小RNA的定量檢測試劑盒，其特征是，所述莖3部
分與莖1和莖2部分互補(bǔ)配對長度為6-12堿基對；所述延伸部分的長度為3-12個堿基。