本發明公開一種血清總膽汁酸檢測試劑盒及其使用方法，所述試劑盒包括血清樣品預處理液、磷酸鹽緩沖液、3α-羥基類固醇脫氫酶(3α—HSD)、氧化型輔酶I(NAD)及絲網印刷電極。所述血清總膽汁酸檢測試劑盒采用絲網印刷電極進行電化學檢測，通過電化學分析方法間接地實現血清總膽汁酸的快速、準確測定，是一種試劑簡單，價格低廉，使用方便，高性價比的血清總膽汁酸檢測試劑盒。

1.一種血清總膽汁酸檢測試劑盒，其特征在于：包括血清樣品預處理液、磷酸鹽緩沖液、3α-
羥基類固醇脫氫酶(3α-HSD)、氧化型輔酶I(NAD⁺)及絲網印刷電極，其中，所述血
清樣品預處理液為甲醇，所述磷酸鹽緩沖液為0.2mol/L，pH＝12.2的磷酸鹽緩沖液，所述
3α-HSD活性為40U/mL，所述NAD⁺濃度為100mmol/L，所述絲網印刷電極包括PET基板，
PET基板上以碳漿印制工作電極和輔助電極、Ag/AgCl漿印制成參比電極，工作電極、輔
助電極和參比電極與相應的電極觸點間通過碳漿連接，再在PET基板上除工作電極、輔
助電極和參比電極形成的一圓形工作區域外印刷上一層絕緣膠。
2.根據權利要求1所述的血清總膽汁酸檢測試劑盒，其中，所述磷酸鹽緩沖液由0.2mol/L
磷酸氫二鈉溶液和飽和氫氧化鈉溶液配制。
3.一種如權利要求1-2任意之一項所述的血清總膽汁酸檢測試劑盒的使用方法，其特征在
于，包括如下步驟：
1)用所述血清樣品預處理液除去血清樣品中的蛋白；
2)將除去蛋白后的所述血清樣品離心，取上清液用氮氣吹干，用磷酸鹽緩沖液復溶；
3)分別取步驟2)得到的溶液、3α-HSD溶液及NAD⁺溶液于Ep管中并混勻，在室
溫下進行酶反應10min，得到膽汁酸酶催化反應混合液；
4)所述絲網印刷電極與電化學工作站連接，取步驟3)得到的所述膽汁酸酶催化反應
混合液滴加在所述電極的工作區域，用示差脈沖伏安法對酶反應產物NADH的氧化峰電
流進行測定。
4.根據權利要求3所述的血清總膽汁酸檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步
驟：
1)用甲醇除去血清樣品中的蛋白；
2)將除去蛋白后的所述血清樣品離心，取上清液用氮氣吹干，用0.2mol/L，pH＝12.2
的磷酸鹽緩沖液復溶，所述甲醇，血清樣品與磷酸鹽緩沖液的體積比為12∶4∶1；
3)分別取步驟2)得到的溶液、40U/mL的3α-HSD溶液及100mmol/L的NAD⁺溶液
于Ep管中并混勻，在室溫下進行酶反應10min，得到膽汁酸酶催化反應混合液。所述步
驟2)得到的溶液，3α-HSD溶液與NAD⁺溶液的體積比為10∶1∶10；
4)所述絲網印刷電極與電化學儀連接，取步驟3)得到的所述膽汁酸酶催化反應混合
液滴加在所述電極的工作區域，用示差脈沖伏安法對酶反應產物NADH的氧化峰電流進
行測定。
5.如權利要求4所述的血清總膽汁酸檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下具體
步驟：
1)取100μL血清樣品于Ep管中，渦旋條件下逐滴加入300μL甲醇除去血清中的蛋
白；
2)將除去蛋白后的血清樣品離心，取上清液在60℃用氮氣吹干，用25μL0.2mol/L，
pH＝12.2的磷酸緩沖液復溶；
3)分別取10μL步驟2)得到的溶液、1μL40U/mL的3α-HSD溶液和10μL100mmol/L
的NAD⁺溶液渦旋混勻，在室溫下進行酶反應10min，得到膽汁酸酶催化反應混合液；
4)所述絲網印刷電極與電化學儀連接，將步驟3)得到的膽汁酸酶催化反應混合液
滴加在所述電極的工作區域，對酶反應產物NADH的氧化峰電流進行測定從而對血清總
膽汁酸定量，其參數設置為：低電位0V，高電位+1V，電位增量0.005V、振幅0.1V、
脈沖寬度0.05s、脈沖周期0.2s。