本發明涉及一種利用核酸恒溫擴增檢測結核分枝桿菌的快速檢測技術，以及定性檢測的試劑盒。該試劑盒包含無儀器DNA提取試劑盒、結核分枝桿菌核酸恒溫擴增反應液、防污染核酸擴增物檢測裝置、結核分枝桿菌陽性對照、結核分枝桿菌陰性對照。本發明的檢測試劑盒特異性高、靈敏度高；反應速度快，單個樣本從樣本處理到完成檢測，僅需1～1.5小時；可同時滿足中通量和低通量的樣品檢測，特別適合現場檢測以及基層醫院使用，且整個反應過程只需一個恒溫儀器。

1.一種利用核酸恒溫擴增檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：?(1)無儀器DNA提取試劑盒；所述的無儀器DNA提取試劑盒包括：微量核酸提取裝置、抽吸裝置、細胞裂解液、清洗液及洗脫液；?(2)結核分枝桿菌核酸恒溫擴增反應液；?(3)陽性對照：為含有結核分枝桿菌IS6110基因的DNA片段；?(4)陰性對照：為無菌雙蒸水；?其中，所述結核分枝桿菌核酸恒溫擴增反應液的組成為：?正向外圍引物 0.01～0.05μmol； 反向外圍引物 0.01～0.05μmol； 正向交叉引物 0.01～0.05μmol； 反向交叉引物 0.01～0.05μmol； 正向探針 0.1～0.5μmol； 反向探針 0.1～0.5μmol； MgSO₄3～6mmol； dNTPs溶液 0.2～0.4mmol； Bst?DNA聚合酶 6～10U； 10×Thermol?buffer 2μl； 無菌雙蒸水 補足到16μl； 其中，所述的正向外圍引物為SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列；?所述的反向外圍引物為SEQ?ID?NO:2所示的核苷酸序列；?所述的正向探針為5’端標記有Biotin的SEQ?ID?NO:3所示的核苷酸序列；?所述的反向探針選自3’端標記有FitC的SEQ?ID?NO:4所示的核苷酸序列；?所述正向交叉引物選自SEQ?ID?NO:5所示的核苷酸序列；?所述反向交叉引物選自SEQ?ID?NO:6所示的核苷酸序列。?2.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌檢測試劑盒，其特征在于，結核分枝桿菌核酸恒溫擴增反應液的組成為：?正向外圍引物 0.03～0.05μmol； 反向外圍引物 0.03～0.05μmol； 正向交叉引物 0.03～0.05μmol； 反向交叉引物 0.03～0.05μmol； 正向探針 0.3～0.5μmol； 反向探針 0.3～0.5μmol； MgSO₄5～6mmol； dNTPs溶液 0.3～0.4mmol； Bst?DNA聚合酶 8～10U； 10×Thermol?buffer 2μl； 無菌雙蒸水 補足到16μl。 3.根據權利要求2所述的結核分枝桿菌檢測試劑盒，其特征在于，所述結核分枝桿菌核酸恒溫擴增反應液的組成為：?正向外圍引物 0.05μmol； 反向外圍引物 0.05μmol； 正向交叉引物 0.05μmol； 反向交叉引物 0.05μmol； 正向探針 0.5μmol； 反向探針 0.5μmol； MgSO₄6mmol； dNTPs溶液 0.4mmol； Bst?DNA聚合酶 10U； 10×Thermol?buffer 2μl； 無菌雙蒸水 補足到16μl。 4.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌檢測試劑盒，其特征在于，所述的微量核酸提取裝置包括管狀主體（1），管狀主體一端設有用于與抽吸裝置連接的接頭（2），另一端為插頭（3），用于與核酸結合的濾芯裝置（4）安裝于管狀主體或插頭內；微量核酸提取裝置的管狀主體與插頭為一體或由管狀主體與插頭兩個部件連接而成，其中，所述插頭為錐狀。?5.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌檢測試劑盒，其特征在于，所述的10×Thermol?buffer含有摩爾濃度為20mM的Tris-HCl、10mM的KCl、10mM的(NH₄)₂SO₄、2mM的MgSO₄以及質量濃度為0.1%的Triton?X-100，pH8.8。?6.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述的結核分枝桿菌陽性?對照含有如SEQ?ID?NO:7所示的、長198bp的結核分枝桿菌IS6110基因序列。?7.根據權利要求1～6任一所述的結核分枝桿菌檢測試劑盒，其特征在于：所述的結核分枝桿菌陽性對照中的結核分枝桿菌DNA，制備方法包括下列步驟：?（1）利用兩條外圍引物SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2進行PCR擴增獲得目的基因；?（2）對步驟（1）得到的PCR擴增產物進行純化；?（3）將步驟（2）得到的純化后的擴增產物通過質粒轉染試劑盒構建完整的含有目的基因SEQ?ID?NO:7所示的質粒序列；?（4）將所抽提的質粒定量并稀釋至10⁶拷貝/μl，-20℃保存。?