1.虎源性、豹源性DNA的PCR檢測引物,其特征在于:
引物序列:
正向引物(SEQ?ID?NO.1):5’GAATATACTATGGCTCCTACAC?3’,
反向引物(SEQ?ID?NO.2):5’GGTTGGCGGGGATGTAGTTA?3’。
2.虎源性、豹源性DNA的PCR檢測試劑盒,其特征在于該試劑盒中包括
一種檢測溶液,該檢測溶液中含10×PCR緩沖液、10μmol/L正向引物、10μmol/L
反向引物、10m?mol/L?dNTP、5U/μL?Taq?DNA聚合酶;
其中,所述的正向引物序列為SEQ?ID?NO.1,反向引物序列為SEQ?ID?NO.2。
3.虎源性、豹源性DNA的PCR檢測方法,其特征在于使用權利要求2所
述的試劑盒,包括如下步驟:
①提取待測樣品DNA,得到模板DNA溶液;
②反應體系:取1μl步驟①制得的模板DNA溶液,加入上述試劑盒中的
溶液6.2μl,再加入滅菌超純水至總體積25μl;將以上各組分加入至0.2mL?PCR
反應管中,混勻,5000r/min,離心10s;
③步驟②的反應體系按下述條件進行實時熒光PCR檢測:
預變性:94℃,3min;
進入循環:94℃變性60s,66℃退火60s,72℃延伸60s,35次循環;
終止延伸:72℃,7min;
4℃保存反應產物;
④對步驟③的反應產物進行電泳,根據反應產物的電泳條帶大小判定結果。
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