本發(fā)明提供了用于核酸的有效擴(kuò)增的方法和試劑盒。本公開主要涉及用于所關(guān)心的靶核酸的核酸擴(kuò)增的試劑盒和方法。本文描述的方法通過在擴(kuò)增過程中使用新的修飾引物，減少不需要的引物二聚體結(jié)構(gòu)和嵌合核酸產(chǎn)物的產(chǎn)生而促進(jìn)靶核酸（即，模板核酸）的合成。

1.用于擴(kuò)增核酸的方法，包括：
a）提供核酸模板；
b）使核酸模板與包含DNA聚合酶、脫氧核糖核苷三磷酸和具有3'末端和5'末端的引物
的反應(yīng)溶液接觸，其中所述引物包含：（i）核苷酸類似物2-氨基-脫氧腺苷（2-氨基-dA），其
中2-氨基-dA的并入提高引物的解鏈溫度（T_m），和（ii）核苷酸類似物2-硫代-脫氧胸苷（2-
硫代-dT），其中在所述引物中核苷酸類似物2-氨基-dA和核苷酸類似物2-硫代-dT的并入防
止引物二聚體形成，其中所述引物是六聚體，其中所述六聚體具有如下通用結(jié)構(gòu)：(+N)(+N)
(atN)(atN)(atN)*N，其中(+N)是六聚體的5'末端核苷酸，*N是六聚體的3'末端核苷酸，以
及其中“N”表示脫氧腺苷（dA）、脫氧胞苷（dC）、脫氧鳥苷（dG）或脫氧胸苷（dT），“+”表示在核
苷酸堿基之前的LNA，(atN)表示2-氨基-dA、dC、dG和2-硫代-dT的隨機(jī)混合物，“*”表示硫代
磷酸酯鍵；以及
c）擴(kuò)增所述核酸模板。
2.權(quán)利要求1的方法，其中擴(kuò)增所述核酸模板在等溫條件下實(shí)施。
3.權(quán)利要求1的方法，其中擴(kuò)增所述核酸模板在高嚴(yán)格條件下實(shí)施。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述DNA聚合酶為phi29 DNA聚合酶。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述引物為隨機(jī)引物。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述引物中的一種核苷酸類似物是在核苷酸堿基之前的鎖
定核酸（LNA），其中在所述引物中所述LNA核苷酸堿基的并入提高引物的T_m。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述LNA核苷酸堿基不位于該引物的 3'末端。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述引物進(jìn)一步包含在核苷酸堿基之前的LNA。
9.權(quán)利要求1的方法，其中擴(kuò)增所述核酸模板包括滾環(huán)擴(kuò)增（RCA）或多重置換擴(kuò)增
（MDA）。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述方法允許痕量核酸的擴(kuò)增。
11.用于擴(kuò)增核酸的試劑盒，包括：
（a）DNA聚合酶；
（b）脫氧核糖核苷三磷酸;以及
（c）具有3'末端和5'末端的引物，其包含：（i）提高引物的解鏈溫度（T_m）的核苷酸類似物
2-氨基-dA和（ii）核苷酸類似物2-硫代-dT，其中在所述引物中2-氨基-dA和2-硫代-dT的并
入防止引物二聚體形成，其中所述引物為六聚體，其中所述六聚體具有如下通用結(jié)構(gòu)：(+N)
(+N)(atN)(atN)(atN)*N，其中所述六聚體的5'末端是(+N)，所述六聚體的3'末端是*N，“N”
表示dA、dC、dG或dT，其中(atN)表示2-氨基-dA、dC、dG和2-硫代-dT的隨機(jī)混合物，“*"表示
硫代磷酸酯鍵。
12.權(quán)利要求11的試劑盒，其中所述DNA聚合酶為phi29 DNA聚合酶。