本發(fā)明提供一種檢測Leber病線粒體T14502C試劑盒，由DNA提取混合液、擴(kuò)增T14502C片段的PCR混合液、針對T14502C設(shè)計的一對外引物和一對內(nèi)引物、限制性內(nèi)切酶、陽性對照和陰性對照組成。不僅解決了傳統(tǒng)上從Leber病患者血液中提取DNA的問題，減輕被檢者的痛苦；而且還解決了跨地區(qū)傳遞樣本的問題，血濾紙片、毛發(fā)以及口腔粘膜刮片或唾液斑濾紙片等可以很容易的放在信封內(nèi)，并可通過郵寄的方式跨地區(qū)傳遞。本發(fā)明試劑盒應(yīng)用成本低；檢測流程簡便、快速，結(jié)果判讀直觀，應(yīng)用本發(fā)明可確保檢測結(jié)果的特異性和穩(wěn)定性，可在檢測與Leber病相關(guān)的線粒體基因T14502C突變中的應(yīng)用。

1.一種檢測Leber病線粒體T14502C試劑盒，由DNA提取混合液、擴(kuò)增T14502C片段的PCR
混合液、針對T14502C設(shè)計的一對外引物、針對T14502C設(shè)計的一對內(nèi)引物、限制性內(nèi)切酶、
陽性對照和陰性對照組成，其中，提取DNA提取混合液主要由細(xì)胞裂解液、蛋白酶K、氯仿、苯
酚、無水酒精組成；擴(kuò)增T14502C片段的PCR混合液試劑包括dNTP、10×PCR緩沖液、MgCl₂、三
蒸水和Taq酶，其特征在于，針對T14502C設(shè)計的一對外引物是外前向引物F: GCA TAA TTA
AAC TTT ACT TC (SEQ ID NO:1)，外反向引物R: AGA ATA TTG AGG CGC CAT TG (SEQ ID
NO:2)；針對T14502C設(shè)計的一對內(nèi)引物包括內(nèi)前向引物F:TACTCCTC
AATAGCCATCGCTGTAGTATATCCAAAGACAACCATCATTCCCCCTAAATTAA(SEQ ID NO:3)，內(nèi)反向引物
R:TCTGTTGAGTGTGGGTTTAGTAA(SEQ ID NO:4)；限制性內(nèi)切酶是限制性內(nèi)切酶PacⅠ；陽性對
照是含有線粒體序列第14502位點不能夠發(fā)生酶切樣本；陰性對照是線粒體序列第14502位
點發(fā)生酶切樣本。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測Leber病線粒體T14502C試劑盒，其特征在于，在擴(kuò)增
T14502C的PCR混合液中添加0.1-0.2μl二甲基亞砜。