本發明提供了一種副溶血性弧菌毒素基因多重定量PCR檢測試劑盒及檢測方法。所述試劑盒主要包括特異性引物和探針以及PCR反應試劑，所述特異性引物和探針由副溶血性弧菌耐熱直接溶血素基因(tdh)、不耐熱溶血素基因(tlh)、毒素表達調控蛋白基因(toxR)和耐熱相關溶血素基因(trh)的特異性引物和探針組成。本發明針對副溶血弧菌毒素基因提供了一種快速、敏感、特異的多重熒光定量PCR檢測試劑盒和檢測方法，為及時控制副溶血性弧菌食物中毒及其早期診斷提供了基礎。

1.一種副溶血性弧菌毒素基因多重定量PCR檢測試劑盒，主要包括特異
性引物和探針以及PCR反應試劑，所述特異性引物和探針由副溶血性
弧菌耐熱直接溶血素基因（tdh）、不耐熱溶血素基因（tlh）、毒素表達
調控蛋白基因（toxR）和耐熱相關溶血素基因（trh）的特異性引物和
探針組成：
tdh上游引物:5′-TCTGCTTTTGAGCTTCCATCTGT-3′；
tdh下游引物:5′-TGACCGGAGCTTGGGTATTAA-3′；
tdh熒光探針:
5′-FAM-CCTGCCCCCGGTTCTGATGAGATATT-BHQ1-3′；
tlh上游引物:5′-CCAGAAGAGCACGGTTTC-3′；
tlh下游引物:5′-GGTGTACATGTAATCGACAGACGAT-3′；
tlh熒光探針:
5′-VIC-CGATCCTTGTTTGGACATCAACCGCT-BHQ1-3′；
toxR上游引物:5′-TTCCGTCAGATTGGTGAGTATCAG-3′；
toxR下游引物:5′-TGCTCAATAGAAGGCAACCAGTT-3′；
toxR熒光探針:
5′-ROX-TGATGACACCTGTAAATCACCCGCAAATC-BHQ2-3′；
trh上游引物:5′-TGCTATTGGCTTCGATATTTTCAGTA-3′；
trh下游引物:5′-CGAACCTGGAGAAGGAAAAGGT-3′；
trh熒光探針:
5′-CY5-CTAAATCATTCGCGATTGACCTGCCATC-BHQ2-3′；
其中FAM、VIC、ROX和CY5為不同波長的熒光報告基團，BHQ1
和BHQ2為熒光淬滅基團。
2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括副溶血性
弧菌耐熱直接溶血素基因（tdh）、不耐熱溶血素基因（tlh）、毒素表達
調控蛋白基因（toxR）和耐熱相關溶血素基因（trh）的標準品，所述
標準品序列如下：
tdh標準品：tctgcttttga?gcttccatct?gtcccttttc?ctgcccccg?gttctgatga?gatattgttt?
gttgttcgag?atacaacttt?taatacccaa?gctccggtca；
tlh標準品：ccagaagagc?acggtttcgt?gaacgcgagt?gatccttgtt?tggacatcaa?
ccgctcatcg?tctgtcgatt?acatgtacacc；
toxR標準品：ttccgt?cagattggtg?agtatcagaa?cgtaccagtg?atgacacctg?taaatcaccc?
gcaaatcaac?aactggttgc?cttctattga?gca；
trh標準品：tgctattg?gcttcgatat?tttcagtatc?taaatcattc?gcgattgacc?taccatccat?
accttttcct?tctccaggtt?cg。