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糖類抗原19-9時間分辨免疫熒光分析法及試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-25
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201210065707.1 
  • 技術(專利)名稱 糖類抗原19-9時間分辨免疫熒光分析法及試劑盒 
  • 項目單位 珀金埃爾默醫學診斷產品(上海)有限公司
  • 發明人 于春紅,夏秋蘭 
  • 行業類別 醫藥制造-包裝材料
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 楊軍梅
  • 發布時間 2021-09-25  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種糖類抗原19-9時間分辨免疫熒光分析法及試劑盒,該分析法包括:①固相抗體制備;②鑭系元素離子標記抗體制備;③在步驟①制得的具有固相抗體的固相材料中,加入糖類抗原19-9標準品或待測樣品,以及反應緩沖液,經孵育、洗滌固相材料后,加入稀釋的標記抗體,再次孵育后進行熒光檢測;本發明還提供相應的試劑盒。本發明具有較高的靈敏度、特異性、穩定性,而且檢測時間短,檢測CA19-9國家質控品符合率高的特點。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種根據糖類抗原19-9時間分辨免疫熒光分析法的糖類抗原19-9定量檢測試劑盒,
    其特征在于:包括:包被抗糖類抗原19-9單克隆抗體的固相材料,反應緩沖液,鑭系元素離
    子標記的抗糖類抗原單克隆抗體,糖類抗原19-9標準品;
    其中,所述糖類抗原19-9時間分辨免疫熒光分析法,包括步驟:
    ①固相抗體制備
    將抗糖類抗原19-9單克隆抗體稀釋后,作為包被液,包被固相材料,形成具有固相抗體
    的固相材料;
    其中,步驟①中,具體制備步驟,包括:
    (1)將抗糖類抗原19-9單克隆抗體用包被緩沖液稀釋至抗體濃度為1.0~10.0μg/ml,作為
    包被液,與固相材料接觸并靜置5~24小時;
    其中,包被緩沖液包括:pH?9.3-9.7的50mM碳酸鹽緩沖溶液;
    固相材料包括:微孔反應條、或由微孔反應條形成的微孔反應板;
    (2)用含表面活性劑的緩沖液,洗滌步驟(1)制備的抗體包被的固相材料后,加入含封
    閉蛋白的緩沖液,靜置3~12小時;
    其中,含表面活性劑的緩沖液,包括:含0.1%Tween-20的50mM?pH?7.8TSA緩沖液,
    而50mM?pH?7.8TSA緩沖液為50mM?Tris,含150mM?NaCl、1%BSA、16%的蔗糖;
    含封閉蛋白的緩沖液,包括:含0.5%酪蛋白的0.1%Tween-20的50mM?pH?7.8TSA緩沖
    液;
    (3)棄去含封閉蛋白的緩沖液,干燥固相材料,完成固相抗體制備;
    ②鑭系元素離子標記抗體制備
    選用配對的第一抗糖類抗原19-9單克隆抗體和第二抗糖類抗原19-9單克隆抗體,分別
    進行鑭系元素離子標記,形成標記抗體A、B;
    其中,鑭系元素離子包括:Eu3+、Sm3+、Dy3+或Tb3+
    ③在步驟①制得的具有固相抗體的固相材料中,加入糖類抗原19-9標準品或待測樣品,
    以及反應緩沖液,經孵育、洗滌固相材料后,加入稀釋的混合標記抗體A和B,再次孵育后
    進行熒光檢測;
    其中,反應緩沖液包括:pH?7.6-8.0的50mmol/L?Tris-HCl,內含0.9%NaCl、2%BSA、
    0.05%牛IgG、0.1%Tween-20和0.1%NaN3
    2.如權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:還包括:洗滌液、增強液。
    3.如權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟②中,形成鑭系元素離子的試
    劑與抗糖類抗原19-9單克隆抗體的質量比為1:2~1:1。
    4.如權利要求2所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟②中,鑭系元素離子為Eu3+
    5.如權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟③中,糖類抗原19-9標準品的
    制備方法為:先分別將糖類抗原19-9稀釋至所需的最高濃度,再采用倍比稀釋法稀釋至所需
    濃度,獲得糖類抗原19-9標準品。
    6.如權利要求5所述的試劑盒,其特征在于:所述標準品為用含20%小牛血清、0.1%NaN3
    的生理鹽水將糖類抗原19-9配制成標準品。
    7.如權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟③中,在20-25℃孵育1~2h后,
    采用含表面活性劑的緩沖液的稀釋液作為洗滌液,洗滌固相材料,其中,含表面活性劑的緩
    沖液,包括:含0.1%Tween-20的50mM?pH?7.8TSA緩沖液,而50mM?pH?7.8TSA緩沖液為
    50mM?Tris,含150mM?NaCl、1%BSA、16%的蔗糖;
    含表面活性劑的緩沖液的稀釋液,是將含表面活性劑的緩沖液與水以體積比為1:24的比
    例稀釋;
    稀釋的混合標記抗體A和B為:先將單獨標記好的抗體A和B按照質量比3:1的比例混
    合至使用濃度的20倍,再將混合后的標記抗體用反應緩沖液以體積比為1:20稀釋;稀釋的
    混合標記抗體A和B中的標記抗體總濃度為1-5μg/ml;
    再次孵育中,在20-25℃孵育1~2h。
    8.如權利要求7所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟③中,再次孵育之后,經再次洗
    滌固相材料后,加入增強液進行熒光檢測;
    其中,增強液為含1.0%冰乙酸和2.0%鄰苯二甲酸氫鉀的緩沖液,pH?3.0-4.5,該緩沖液
    中同時含有0.4%β-萘基甲酰三氟丙酮、2%三正辛基氧膦、0.1%Triton?X-100。
    展開

專利技術附圖

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