1.一種根據糖類抗原19-9時間分辨免疫熒光分析法的糖類抗原19-9定量檢測試劑盒，
其特征在于：包括：包被抗糖類抗原19-9單克隆抗體的固相材料，反應緩沖液，鑭系元素離
子標記的抗糖類抗原單克隆抗體，糖類抗原19-9標準品；
其中，所述糖類抗原19-9時間分辨免疫熒光分析法，包括步驟：
①固相抗體制備
將抗糖類抗原19-9單克隆抗體稀釋后，作為包被液，包被固相材料，形成具有固相抗體
的固相材料；
其中，步驟①中，具體制備步驟，包括：
(1)將抗糖類抗原19-9單克隆抗體用包被緩沖液稀釋至抗體濃度為1.0～10.0μg/ml，作為
包被液，與固相材料接觸并靜置5～24小時；
其中，包被緩沖液包括：pH?9.3-9.7的50mM碳酸鹽緩沖溶液；
固相材料包括：微孔反應條、或由微孔反應條形成的微孔反應板；
(2)用含表面活性劑的緩沖液，洗滌步驟(1)制備的抗體包被的固相材料后，加入含封
閉蛋白的緩沖液，靜置3～12小時；
其中，含表面活性劑的緩沖液，包括：含0.1％Tween-20的50mM?pH?7.8TSA緩沖液，
而50mM?pH?7.8TSA緩沖液為50mM?Tris，含150mM?NaCl、1％BSA、16％的蔗糖；
含封閉蛋白的緩沖液，包括：含0.5％酪蛋白的0.1％Tween-20的50mM?pH?7.8TSA緩沖
液；
(3)棄去含封閉蛋白的緩沖液，干燥固相材料，完成固相抗體制備；
②鑭系元素離子標記抗體制備
選用配對的第一抗糖類抗原19-9單克隆抗體和第二抗糖類抗原19-9單克隆抗體，分別
進行鑭系元素離子標記，形成標記抗體A、B；
其中，鑭系元素離子包括：Eu3+、Sm3+、Dy3+或Tb3+；
③在步驟①制得的具有固相抗體的固相材料中，加入糖類抗原19-9標準品或待測樣品，
以及反應緩沖液，經孵育、洗滌固相材料后，加入稀釋的混合標記抗體A和B，再次孵育后
進行熒光檢測；
其中，反應緩沖液包括：pH?7.6-8.0的50mmol/L?Tris-HCl，內含0.9％NaCl、2％BSA、
0.05％牛IgG、0.1％Tween-20和0.1％NaN3。
2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：還包括：洗滌液、增強液。
3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述步驟②中，形成鑭系元素離子的試
劑與抗糖類抗原19-9單克隆抗體的質量比為1:2～1:1。
4.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述步驟②中，鑭系元素離子為Eu3+。
5.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述步驟③中，糖類抗原19-9標準品的
制備方法為：先分別將糖類抗原19-9稀釋至所需的最高濃度，再采用倍比稀釋法稀釋至所需
濃度，獲得糖類抗原19-9標準品。
6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述標準品為用含20％小牛血清、0.1％NaN3
的生理鹽水將糖類抗原19-9配制成標準品。
7.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述步驟③中，在20-25℃孵育1～2h后，
采用含表面活性劑的緩沖液的稀釋液作為洗滌液，洗滌固相材料，其中，含表面活性劑的緩
沖液，包括：含0.1％Tween-20的50mM?pH?7.8TSA緩沖液，而50mM?pH?7.8TSA緩沖液為
50mM?Tris，含150mM?NaCl、1％BSA、16％的蔗糖；
含表面活性劑的緩沖液的稀釋液，是將含表面活性劑的緩沖液與水以體積比為1:24的比
例稀釋；
稀釋的混合標記抗體A和B為：先將單獨標記好的抗體A和B按照質量比3:1的比例混
合至使用濃度的20倍，再將混合后的標記抗體用反應緩沖液以體積比為1:20稀釋；稀釋的
混合標記抗體A和B中的標記抗體總濃度為1-5μg/ml；
再次孵育中，在20-25℃孵育1～2h。
8.如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述步驟③中，再次孵育之后，經再次洗
滌固相材料后，加入增強液進行熒光檢測；
其中，增強液為含1.0％冰乙酸和2.0％鄰苯二甲酸氫鉀的緩沖液，pH?3.0-4.5，該緩沖液
中同時含有0.4％β-萘基甲酰三氟丙酮、2％三正辛基氧膦、0.1％Triton?X-100。
展開
