1.一種根據糖類抗原19-9時間分辨免疫熒光分析法的糖類抗原19-9定量檢測試劑盒,
其特征在于:包括:包被抗糖類抗原19-9單克隆抗體的固相材料,反應緩沖液,鑭系元素離
子標記的抗糖類抗原單克隆抗體,糖類抗原19-9標準品;
其中,所述糖類抗原19-9時間分辨免疫熒光分析法,包括步驟:
①固相抗體制備
將抗糖類抗原19-9單克隆抗體稀釋后,作為包被液,包被固相材料,形成具有固相抗體
的固相材料;
其中,步驟①中,具體制備步驟,包括:
(1)將抗糖類抗原19-9單克隆抗體用包被緩沖液稀釋至抗體濃度為1.0~10.0μg/ml,作為
包被液,與固相材料接觸并靜置5~24小時;
其中,包被緩沖液包括:pH?9.3-9.7的50mM碳酸鹽緩沖溶液;
固相材料包括:微孔反應條、或由微孔反應條形成的微孔反應板;
(2)用含表面活性劑的緩沖液,洗滌步驟(1)制備的抗體包被的固相材料后,加入含封
閉蛋白的緩沖液,靜置3~12小時;
其中,含表面活性劑的緩沖液,包括:含0.1%Tween-20的50mM?pH?7.8TSA緩沖液,
而50mM?pH?7.8TSA緩沖液為50mM?Tris,含150mM?NaCl、1%BSA、16%的蔗糖;
含封閉蛋白的緩沖液,包括:含0.5%酪蛋白的0.1%Tween-20的50mM?pH?7.8TSA緩沖
液;
(3)棄去含封閉蛋白的緩沖液,干燥固相材料,完成固相抗體制備;
②鑭系元素離子標記抗體制備
選用配對的第一抗糖類抗原19-9單克隆抗體和第二抗糖類抗原19-9單克隆抗體,分別
進行鑭系元素離子標記,形成標記抗體A、B;
其中,鑭系元素離子包括:Eu3+、Sm3+、Dy3+或Tb3+;
③在步驟①制得的具有固相抗體的固相材料中,加入糖類抗原19-9標準品或待測樣品,
以及反應緩沖液,經孵育、洗滌固相材料后,加入稀釋的混合標記抗體A和B,再次孵育后
進行熒光檢測;
其中,反應緩沖液包括:pH?7.6-8.0的50mmol/L?Tris-HCl,內含0.9%NaCl、2%BSA、
0.05%牛IgG、0.1%Tween-20和0.1%NaN3。
2.如權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:還包括:洗滌液、增強液。
3.如權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟②中,形成鑭系元素離子的試
劑與抗糖類抗原19-9單克隆抗體的質量比為1:2~1:1。
4.如權利要求2所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟②中,鑭系元素離子為Eu3+。
5.如權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟③中,糖類抗原19-9標準品的
制備方法為:先分別將糖類抗原19-9稀釋至所需的最高濃度,再采用倍比稀釋法稀釋至所需
濃度,獲得糖類抗原19-9標準品。
6.如權利要求5所述的試劑盒,其特征在于:所述標準品為用含20%小牛血清、0.1%NaN3
的生理鹽水將糖類抗原19-9配制成標準品。
7.如權利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟③中,在20-25℃孵育1~2h后,
采用含表面活性劑的緩沖液的稀釋液作為洗滌液,洗滌固相材料,其中,含表面活性劑的緩
沖液,包括:含0.1%Tween-20的50mM?pH?7.8TSA緩沖液,而50mM?pH?7.8TSA緩沖液為
50mM?Tris,含150mM?NaCl、1%BSA、16%的蔗糖;
含表面活性劑的緩沖液的稀釋液,是將含表面活性劑的緩沖液與水以體積比為1:24的比
例稀釋;
稀釋的混合標記抗體A和B為:先將單獨標記好的抗體A和B按照質量比3:1的比例混
合至使用濃度的20倍,再將混合后的標記抗體用反應緩沖液以體積比為1:20稀釋;稀釋的
混合標記抗體A和B中的標記抗體總濃度為1-5μg/ml;
再次孵育中,在20-25℃孵育1~2h。
8.如權利要求7所述的試劑盒,其特征在于:所述步驟③中,再次孵育之后,經再次洗
滌固相材料后,加入增強液進行熒光檢測;
其中,增強液為含1.0%冰乙酸和2.0%鄰苯二甲酸氫鉀的緩沖液,pH?3.0-4.5,該緩沖液
中同時含有0.4%β-萘基甲酰三氟丙酮、2%三正辛基氧膦、0.1%Triton?X-100。
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