本發(fā)明公開了一種超級細菌NDM-1基因的熒光定量PCR檢測方法及試劑盒。所用引物和TaqMan探針是根據(jù)超級細菌NDM-1基因的保守區(qū)域設(shè)計的，用以定量檢測待測樣品中超級細菌的核酸拷貝數(shù)。上游引物具有序列表中SEQ ID NO：1的核苷酸序列，下游引物具有序列表中SEQ ID NO：2的核苷酸序列；所述TaqMan探針具有序列表中SEQ ID NO：3的核苷酸序列。本發(fā)明能快速、準確地檢測出超級細菌NDM-1基因，對保障人類健康具有重要意義。本發(fā)明對于控制超級細菌傳播和人民用藥安全意義重大。本發(fā)明的檢測方法及試劑盒可用于可疑超級細菌病患者多種樣本、環(huán)境樣本中NDM-1基因的檢測，輔助臨床超級細菌感染的診斷和治療，應(yīng)用前景廣闊。

1.一種用于對超級細菌NDM-1基因進行熒光定量PCR檢測的試劑盒，包括用
于對超級細菌NDM-1基因進行熒光定量PCR檢測的引物和TaqMan探針，所述引物
的上游引物為序列表中SEQ?ID?NO：1表示的核苷酸序列，下游引物為序列表中SEQ?
ID?NO：2表示的核苷酸序列，所述TaqMan探針為序列表中SEQ?ID?NO：3表示的核
苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征在于：所述TaqMan探針為經(jīng)過熒光標
記的，其5’端標記有報告熒光基團FAM，3’端標記有淬滅熒光基團BHQ1。
3.一種用于對超級細菌NDM-1基因進行熒光定量PCR檢測的試劑盒，其特征
在于，包括各自獨立包裝的超級細菌反應(yīng)液1ml/管和Taq聚合酶30μl/管兩個試劑管；
所述超級細菌反應(yīng)液為dNTPs、MgCl₂、PCR引物和熒光探針的混合液，由12.5重量
份的2×buffer、1.5重量份上游引物、2.5重量份下游引物、1.0重量份TaqMan探針和
1.9重量份的DEPC水混合而成；其中2×buffer用含MgCl₂15mM的10×buffer4μL、
dNTP3.5μL和DEPC水5μL配制而成，所述上游引物為序列表中SEQ?ID?NO：1表
示的核苷酸序列，下游引物為序列表中SEQ?ID?NO：2表示的核苷酸序列，所述TaqMan
探針為序列表中SEQ?ID?NO：3表示的核苷酸序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述試劑盒，其特征在于，還包括各自獨立包裝的強陽性對
照品即10^-5稀釋度的質(zhì)粒pBlue-NDM-1、臨界陽性對照品即10^-8稀釋度的質(zhì)粒
pBlue-NDM-1、配方為0.5%NP40，溶劑為TE緩沖液的DNA提取液及作為陰性對照
品的無菌水。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述試劑盒，其特征在于：所述TaqMan探針為經(jīng)過熒
光標記的，其5’端標記有報告熒光基團FAM，3’端標記有淬滅熒光基團BHQ1。
6.一種用于對超級細菌NDM-1基因進行熒光定量PCR檢測的PCR反應(yīng)體系，
其特征在于：25μL熒光定量PCR反應(yīng)體系包括：5pmol/μL的TaqMan探針1.0μL，
5pmol/μL的上游引物1.5μL，5pmol/μL的下游引物2.5μL，樣品DNA5μL，5U的
Taq?DNA聚合酶0.6μL，2×的實時熒光PCR緩沖液12.5μL，補充無菌水至25μL，
所述2×的實時熒光PCR緩沖液用10×buffer4μL加dNTP3.5μL和DEPC水5μL配
制而成；所述上游引物為序列表中SEQ?ID?NO：1表示的核苷酸序列，下游引物為序
列表中SEQ?ID?NO：2表示的核苷酸序列，所述TaqMan探針為序列表中SEQ?ID?NO：
3表示的核苷酸序列。