本發明公開了一種用于早期篩檢大腸癌相關IGF2基因甲基化表型的引物、試劑盒及其應用，屬于疾病的早期篩檢與防治領域。所述引物通過MS?HRM方法檢測IGF2基因啟動子區CpG島的甲基化表型，其中正向引物具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，反向引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。研究表明，采用該引物對待測硫化后的DNA進行MS?HRM分析，可以判斷待檢樣品是否為人大腸癌高危人群。進一步的，本發明還提出了包含上述引物的試劑盒。采用本發明的引物或試劑盒篩檢大腸癌，具有高通量、靈敏度高和特異性好等特點，能夠在人外周血白細胞DNA水平上實現便捷快速地篩檢大腸癌高危人群。

1.一種用于早期篩檢大腸癌相關IGF2基因甲基化表型的引物，其特征在于所述引物由
正向引物和反向引物組成，其中正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核
苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述的引物用于篩檢大腸癌相關IGF2基因甲基化表型時，包括以下步驟：
（1）將待檢的人外周血白細胞DNA進行硫化修飾處理，取硫化后 DNA，作為RT-PCR的反
應模板進行MS-HRM檢測，所述的硫化后 DNA的量至少為20ng/反應；
（2）在總體積為10微升的RT-PCR反應體系中，加入1～2微升的待測硫化后DNA作為模
板，加入正向引物和反向引物，正向引物和反向引物在 RT-PCR反應體系中的終濃度均為
0.4μM；其他試劑按照常規方法及劑量加入；
（3）進行RT-PCR反應，反應條件為：95℃預變性10分鐘；95℃變性10秒，56℃復性30秒，
72℃延伸20秒，采集熒光信號，循環45次；
（4）進行MS-HRM檢測，檢測條件為：95℃預變性1分鐘；40℃復性1分鐘，從60℃按照0.1
℃/秒的梯度進行梯度升溫至98℃，并采集熒光信號，40℃復性10分鐘；
（5）對MS-HRM結果進行Tm-Calling和Gene-Scanning分析：如果待測樣品與陽性標準品
的Tm值相符，且待測樣品的甲基化水平大于0.5%，即Cut-Off值取為0.005，結果為陽性；反
之，結果為陰性。
2.權利要求1所述的引物在制備早期篩檢人大腸癌檢測試劑中的用途。
3.一種用于早期篩檢人大腸癌相關IGF2基因甲基化表型的試劑盒，其特征在于含有權
利要求1所述的引物。
4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于還包括2× PCR MasterMix, 25mM MgCl₂以
及PCR-grade Water。
5.權利要求1所述的引物在制備早期篩檢人大腸癌相關IGF2基因甲基化表型的試劑盒
中的用途。