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一種霍亂弧菌流行株分子鑒定方法及其ISSR-PCR引物及試劑盒

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-10-01
  • 技術(shù)成熟度:已有樣品
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201210356579.6 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種霍亂弧菌流行株分子鑒定方法及其ISSR-PCR引物及試劑盒 
  • 項(xiàng)目單位 珠海國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心
  • 發(fā)明人 莫秋華,林繼洪,梁玉英,楊澤,杜田,趙俊華,史詠梅,王琪 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學(xué)藥品
  • 技術(shù)成熟度 已有樣品
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 尤紫靈
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-10-01  
  • 01

    項(xiàng)目簡(jiǎn)介

    本發(fā)明公開了一種霍亂弧菌流行株分子鑒定方法及其ISSR-PCR引物及試劑盒,該ISSR-PCR引物的堿基序列表示如下:5’-ACGAGAGAGAGA-3’。本發(fā)明通過提供對(duì)霍亂弧菌流行株具有特異性分子鑒定作用的1條ISSR-PCR引物,及包含上述引物的試劑盒及檢測(cè)方法,來檢測(cè)某一分離獲得的霍亂弧菌菌株基因組DNA,進(jìn)而確定該霍亂弧菌菌株是否為流行株。本發(fā)明所述分子鑒定方法具有以下優(yōu)點(diǎn):①操作簡(jiǎn)便;②成本低廉;③特異性強(qiáng),能準(zhǔn)確的區(qū)分霍亂弧菌流行株和非流行株;④重復(fù)性好。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種霍亂弧菌流行株分子鑒定用ISSR-PCR引物,其特征在于:所述引物的堿基序列
    表示如下:
    引物pGA5:5’-ACGAGAGAGAGA-3’。
    2.一種霍亂弧菌流行株分子鑒定用試劑盒,其特征在于:所述試劑盒包括如權(quán)利要求1所
    述的引物pGA5。
    3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒,其特征在于:所述試劑盒還包括2×ISSR-PCR反應(yīng)液和
    Taq?DNA聚合酶,所述2×ISSR-PCR反應(yīng)液包括如下組分:
    20mM的pH8.3的Tris-HCl,100mM的KCl,4mM的MgCl2,0.6mM的dNTP,
    2.4μM的引物pGA5。
    4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于:試劑盒反應(yīng)體系總體積為25μL,含有
    2×ISSR-PCR反應(yīng)液12.5μL,待檢測(cè)基因組DNA100ng~500ng,Taq?DNA聚合酶為
    1.5U,其余為滅菌超純水。
    5.一種霍亂弧菌流行株分子鑒定方法,其特征在于包括如下步驟:
    (1)提取待測(cè)試樣品DNA;
    (2)采用如權(quán)利要求2~4任一所述的試劑盒對(duì)待測(cè)試樣品DNA進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增
    和電泳;
    (3)分析電泳圖譜,判定檢測(cè)結(jié)果。
    6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的鑒定方法,其特征在于:所述鑒定方法還包括3個(gè)參比對(duì)照DNA:
    分別為O1群霍亂弧菌非流行株DNA、O1群霍亂弧菌流行株DNA及O139群霍亂弧
    菌流行株DNA。
    7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的鑒定方法,其特征在于:所述鑒定方法的ISSR-PCR反應(yīng)條件是:
    95℃預(yù)變性3min,然后在94℃40sec,45℃60sec,72℃120sec條件下進(jìn)行3步PCR
    循環(huán)擴(kuò)增,循環(huán)次數(shù)為30次,最后在72℃保溫10min。
    展開

專利技術(shù)附圖

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