本發明公開了一種綿羊肺炎支原體環介導等溫擴增檢測試劑盒的原料配方及制備、使用方法。其原料配方為：1000~2000μL反應液，100~200μLBstDNA聚合酶，50~100μL陽性對照，50~100μL陰性對照，1mL-2mL液體石蠟，1mL-2mL超純水；反應液包括內引物混合液、外引物混合液、LAMP反應緩沖液、Mg及dNTP，五種液體于反應液中體積比為2:2:2.5:2:1。制備方法包括以下內容：第一，最佳反應溫度與時間的確定；第二，特異性檢測、敏感性檢測和臨床應用性檢測；第三，試劑盒包裝。本發明對山羊養殖場綿羊肺炎支原體感染山羊疑似病例病原檢測具有快速、簡易、準確的特點。

1.一種綿羊肺炎支原體環介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：其原料配方為：1000~2000???????????????????????????????????????????????反應液，100~200Bst?DNA聚合酶，50~100陽性對照，50~100陰性對照，1mL-2?mL液體石蠟，1mL-2?mL超純水；反應液包括內引物混合液、外引物混合液、LAMP反應緩沖液、Mg²⁺及dNTP，五種液體于反應液中體積比為2:2:2.5:2:1；內引物與外引物為針對綿羊肺炎支原體?16S?rRNA基因的環介導等溫擴增試驗特異性內引物FIP與BIP、外引物F3與B3，內引物濃度為20，外引物濃度為5，引物序列見表1：表1?內外引物序列引物序列（5’—3’）FIPACTTCATCCTGCACTCTGTGTCTTTT CAGCAGTAAGGAATATTCCACABIPTTAGGGATGTAAACTGCTGTTGTTTT CCGTCAAGACTAAATCATTTCCF3ATTGAGATACGGCCCAGAB3GCCGTCACTTTCTAATAAGGT??。2.根據權利要求1所述的綿羊肺炎支原體環介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：LAMP反應緩沖液為10×ThermoPol?Reaction?Buffer，該LAMP反應緩沖液包括200mmol/L?Tris-HCl、100mmol/L（NH₄）₂SO₄、100mmol/L?KCl、20mmol/L?MgSO₄和1%Triton?X-100。3.根據權利要求1所述的綿羊肺炎支原體環介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：Mg²⁺為MgCl₂溶液，其濃度為25mmol/L。4.根據權利要求1所述的綿羊肺炎支原體環介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：dNTP為dATP、dGTP、dTTP、dCTP和dUTP在內等量的混合游離核苷酸，其濃度為10mmol/?L。5.根據權利要求1所述的綿羊肺炎支原體環介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：Bst?DNA聚合酶濃度為8.0。6.根據權利要求1所述的綿羊肺炎支原體環介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：陽性對照為綿羊肺炎支原體16S?rRNA基因部分序列克隆質粒，其濃度為1.0×10⁵。7.根據權利要求1所述的綿羊肺炎支原體環介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：陰性對照為不含綿羊肺炎支原體16S?rRNA基因的pMD18-T空載體質粒。8.根據權利要求1所述的綿羊肺炎支原體環介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：液體石蠟為分析純石蠟油。