本發明公開了一種檢測Kras基因第12、13密碼子突變位點的方法及其試劑盒，該方法包括步驟：1)提取樣本DNA，作為DNA模板；2)利用一組ARMS引物，其上游引物選自SEQ ID NO.1?8所示序列的任意一種，其下游引物為如SEQ ID NO.9所示序列；如SEQ ID NO.17所示的熒光探針和如SEQ ID NO.18所示的封閉探針，對DNA模板進行熒光PCR擴增；3)檢測熒光PCR擴增中的反應體系的熒光強度，并根據熒光強度達到設定的閾值時所需要的循環次數Ct值來判斷Kras基因第12、13密碼子突變位點的突變。該試劑盒包括：上述ARMS引物、熒光探針和封閉探針。本發明能克服現有測序技術低通量、耗時長、檢測能力有限等缺點，且具有快速、通量高、靈敏度高、特異性好等優點。

1.一種檢測Kras基因第12、13密碼子突變位點的方法，該方法不包括疾病的診斷和治療方法，其特征在于，包括以下步驟：1）提取樣本DNA，將其作為DNA模板；2）利用一組ARMS引物、一個如SEQ ID NO.17所示的熒光探針和一個如SEQ ID NO.18所示的封閉探針，對步驟1）的DNA模板進行熒光PCR擴增；所述一組ARMS引物的上游引物由SEQID NO.1-8所示序列組成，其下游引物為如SEQ ID NO.9所示序列；所述熒光探針為特異性雙環分子信標熒光探針；所述步驟2）中，熒光PCR擴增的總體積為40μl的反應體系如下：2×Premix Ex Taq (Probe qPCR) 20μlRoxⅠ（50×） 0.8μL各條引物 0.005～1.0μmol探針 0.001～1.0μmol10ng/μl DNA模板 1.0～5.0μl水補足至40μl；步驟2）中，所述熒光PCR擴增的反應條件如下：96℃預變性3分鐘，12個循環，95℃變性15秒，70℃退火延伸20秒，64℃退火延伸20秒，72℃延伸10秒；35個循環，95℃變性15秒，70℃退火延伸20秒，64℃退火延伸34秒，72℃延伸10秒；并且35個循環在退火時，檢測FAM熒光信號；3）檢測熒光PCR擴增中的反應體系的熒光強度，并根據熒光強度達到設定的閾值時所需要的循環次數Ct值來判斷Kras基因第12、13密碼子突變位點的突變；所述步驟3）中，判斷Kras基因第12、13密碼子突變位點的突變的標準為：檢測熒光PCR擴增中的反應體系的FAM熒光信號，以質控基因FAM熒光信號達到設定閾值時，表明上樣DNA量在允許范圍內，FAM信號結果可信；以FAM達到設定的閾值時所需要的循環次數Ct值作為陰陽性判斷的標準，Ct值大于等于35：陰性；Ct值小于35：陽性。2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1）中，所述樣本包括：新鮮組織樣本、石蠟包埋組織切片樣本；步驟2）中，所述熒光探針的5’端和3’端分別連接有熒光基團和淬滅基團；其中，熒光基團包括：FAM、HEX、CY5和ROX；淬滅基團包括：BHQ、Eclipse 和TAMRA。3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述熒光基團為FAM或ROX；所述淬滅基團為BHQ。4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟2）中，還包括：利用如SEQ IDNO.21-22所示的質控基因引物和SEQ ID NO.23所示的質控基因探針對步驟1）的DNA模板進行熒光PCR擴增。5.一種用于如權利要求1～4任一項所述的方法的檢測試劑盒，其特征在于，包括：一組ARMS引物，其上游引物由SEQ ID NO.1-8所示序列組成，其下游引物為如SEQ ID NO.9所示序列；一個如SEQ ID NO.17所示的熒光探針和一個如SEQ ID NO.18所示的封閉探針。6. 如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括：如SEQ ID NO.21-22所示的質控基因引物和SEQ ID NO.23所示的質控基因探針。7. 如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括：2×Premix Ex Taq(Probe qPCR)。