永久免费黄色大片-乱老胖熟妇60XXXXXX-亚洲成人手机AV-久久鬼色-三级片视频网站在线观看-韩日成人午夜

您現在的位置: 首頁 > 技術轉讓 > 結合RT-PCR與NEST-PCR的草魚出血病病毒檢測試劑盒和檢測方法

結合RT-PCR與NEST-PCR的草魚出血病病毒檢測試劑盒和檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-26
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201610537898.5 
  • 技術(專利)名稱 結合RT-PCR與NEST-PCR的草魚出血病病毒檢測試劑盒和檢測方法 
  • 項目單位 中國水產科學研究院珠江水產研究所
  • 發明人 葉星,董浚鍵,趙立祥,曾慶凱,孫成飛,田園園 
  • 行業類別 中藥材獲取-植物藥材種植
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 王欣如
  • 發布時間 2021-12-26  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供一種結合RT?PCR與NEST?PCR的草魚出血病病毒檢測試劑盒和檢測方法。設計巢式PCR反應(NEST?PCR),以RT?PCR反應產物作為模板,進行NEST?PCR擴增,有效提高了檢測的靈敏度,可檢測到攜帶較低病毒拷貝數的樣品。
    展開
  • 02

    說明書

    1.結合RT-PCR與NEST-PCR的草魚出血病病毒檢測試劑盒,其特征在于,包括:(1)一步法RT-PCR反應混合液:25μL的反應體系中,包括One Step Enzyme Mix1μL,2×1 Step Buffer12.5μL,引物對1的濃度為0.4μM,所述引物對1具有SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列,具體地,引物對1的序列如下:正向引物:CCCTAATCCTCGCATACTCCACAAC(SEQ ID NO:1)反向引物:TCTTTCACAAATAACCCGTCTCCCG(SEQ ID NO:2)(2)NEST-PCR反應混合液:20μL的反應體系中,包括Premix Taq Mix10μL,引物對2的濃度為0.4μM,所述引物對2具有SEQ ID NO:3-4所示的核苷酸序列,具體地,引物對2的序列如下:正向引物:TGACAGTGCGATTGACAGAGTT(SEQ ID NO:3)反向引物:ATATATGTATAGTGGCGCGTCC(SEQ ID NO:4)2.根據權利要求1所述的結合RT-PCR與NEST-PCR的草魚出血病病毒檢測試劑盒,其特征在于,使用方法包括:(1)、RNA的獲?。禾崛〈郎y草魚組織的總RNA,作為RT-PCR反應的模板;(2)、RT-PCR擴增:采用25μL的擴增體系,將反應混合液置于PCR儀進行RT-PCR擴增,所述反應混合液中,包括步驟(1)獲取的RNA模板2μL,One Step Enzyme Mix1μL,2×1 StepBuffer12.5μL,引物對1的濃度為0.4μM,余量由DEPC處理水補足,放入PCR儀進行RT-PCR擴增,其中,所述引物對1具有SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列,具體地,引物對1的序列如下:正向引物:CCCTAATCCTCGCATACTCCACAAC(SEQ ID NO:1)反向引物:TCTTTCACAAATAACCCGTCTCCCG(SEQ ID NO:2)(3)、檢測RT-PCR擴增結果:取RT-PCR擴增產物,用1%的瓊脂糖凝膠電泳后,置于凝膠成像系統中成像,電泳圖片在349bp大小處有條帶,則確定該樣品攜帶草魚出血病病毒GCRV-GD108株,若電泳圖片在349bp大小處沒有條帶,則繼續進行步驟(4);(4)、NEST-PCR擴增:以電泳圖片在349bp大小處沒有條帶的RT-PCR擴增產物作為模板,進行NEST-PCR擴增,采用20μL的擴增體系:DNA模板2μL,EX Taq Mix10μL,引物對2的濃度為0.4μM,其余為由滅菌ddH2O補足,其中,所述引物對2具有SEQ ID NO:3-4所示的核苷酸序列,具體地,引物對2的序列如下:正向引物:TGACAGTGCGATTGACAGAGTT(SEQ ID NO:3)反向引物:ATATATGTATAGTGGCGCGTCC(SEQ ID NO:4)(5)、檢測NEST-PCR擴增結果:取NEST-PCR擴增產物,用1%的瓊脂糖凝膠電泳后,置于凝膠成像系統中成像,電泳圖片在206bp大小處有條帶,判定該樣品帶有草魚出血病病毒GCRV-GD108株。3.根據權利要求2所述的結合RT-PCR與NEST-PCR的草魚出血病病毒檢測試劑盒,其特征在于,所述步驟(1)具體包括:A、組織預處理:樣品預處理:取待測草魚樣品的組織300mg,加入600μL TN緩沖液,勻漿,室溫12000g離心15min,取上清;所述TN緩沖液為20mM Tris-HCl、0.4M NaCl,其pH為7.4;所述勻漿操作為使用電動勻漿機打5次,每次5-6sec;B、Trizol試劑提取病毒RNA:在1mL Trizol試劑中加入150μL粗提取液,依照Trizol試劑提取RNA的步驟進行,最后溶解30uL DEPC水中,用槍頭輕打幾次或室溫20min,直接用于RT-PCR擴增,或-20度短暫保存、或-80℃冰箱保存。4.根據權利要求2所述的結合RT-PCR與NEST-PCR的草魚出血病病毒檢測試劑盒,其特征在于,所述步驟(4)中,NEST-PCR擴增的條件為:94℃,預變性2min;進入35個循環:98℃10sec,56℃30sec,72℃50sec;最后一個循環結束后72℃延伸10min,4℃保存。
    展開

專利技術附圖

服務流程

過戶資料

  • 買賣雙方需提供資料
  • 平臺提供
  • 過戶后您將獲得
  • 買家
  • 賣家
  • 公司
  • 企業營業執照
  • 企業營業執照

    專利注冊證原件

  • 個人
  • 身份證

    個體戶營業執照

  • 身份證

    專利注冊證原件

  • 專利代理委托書

    轉讓申請書

    轉讓協議

  • 手續合格通知書

    專利證書

    專利利登記簿副本

安全保障

  • 品類齊全

    海量資源庫,平臺整合幾十萬閑置資源。
  • 交易保障

    完善的資金保障體系確保買賣雙方資金安全。
  • 專人跟進

    專業交易顧問全程服跟進,確保交易流暢。
  • 快速響應

    專業在線/電話客服服務,快速響應貼心服務。
  • 售后無憂

    資質過硬,國內大知識產權服務平臺。
  • -我要咨詢-
  • ×
聯系人:
專利名稱: *
聯系電話: *
驗證碼:

提交

關于我們 | 聯系我們

傳真:0435-3213171 電話:18801213919 郵箱:lizhiwen@bayuegua.com 地址:吉林省通化市東昌區新華大街1003號(通化市科技成果轉化中心)


舉報電話:0435-5112631     舉報郵箱:chenwenbo@bayuegua.com

備案號ICP備18003140號-1
主站蜘蛛池模板: 日本护士黄色片 | 2025中文无码精品a∨无卡在线 | 国模私拍一区二区三区 | 免费无码又爽又黄A站 | 少妇一级婬片A片无码粉色视频 | 无码秘 蜜桃一区二区三区 无码免费淫AV片在线观看 | 寡妇高潮A片免费播放 | 蜜臀久久精品久久久用户群体 | 亚洲午夜AV| 69仙踪林精品视频一区二区 | 午夜av影院 | 91麻豆产精品久久久久久 | 国产一区二区 | 精品无码一区二区三区在线播放 | 免费 无码 在线观看19 | 丰满少妇乱子伦精品看片 | 熟女 人妻 人妻の视频 | 精品人妻在线 | 精品91| 国产一卡2卡三卡4卡芒果 | 91精品综合久久久久久五回天 | 久久全国免费视频 | 亚洲av影院| 综合成人在线 | 性做久久久久久久免费看 | 亚洲精品传媒 | 99re这里只有精品99 | 免费看无码一级A片放24小时 | 成人二区| 中伊人妻丝袜中文字幕 | 一区二区三区国产 | 东京热男人的天堂 | 国产中文在线 | 天美传奇MV观看免费完整 | 免费无码成人片在线播放 | ...国产成a人亚洲精品无码樱花 | 无码av免费看 | 国产91哺乳期挤奶真人 | 亚洲午夜精品视频 | 婷婷开心色 | 91色色 |