本發(fā)明公開了一種鑒別ISAV的雙重實(shí)時(shí)熒光RT?PCR方法及試劑盒，設(shè)計(jì)特異性引物和Taq Man探針，用于鑒定ISAV，另設(shè)計(jì)一套引物和探針，用于區(qū)分致病力差異毒株，建立單管中鑒定ISAV并區(qū)分ISAV?HPR0和HPRΔ的雙重Taq Man熒光定量PCR方法。本發(fā)明的方法高效、敏感、特異、定量、重復(fù)性好，在口岸檢疫中具有廣闊的應(yīng)用前景，對(duì)于ISAV致病力差異毒株的鑒別診斷具有一定的參考意義。

1.對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒HE基因的特異性引物對(duì)和探針HE-Probe，對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒NS基因的特異性引物對(duì)和探針NS-Probe在制備鑒定傳染性鮭魚貧血病毒的試劑盒中的用途，其特征在于，以待鑒定樣本的病毒RNA為模版，利用對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒HE基因的特異性引物對(duì)和探針HE-Probe，對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒NS基因的特異性引物對(duì)和探針NS-Probe，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)；所述對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒HE基因的特異性引物對(duì)的上游引物HE-F序列如SEQ IDNO:1所示，下游引物HE-R序列如SEQ ID NO:2所示，探針HE-Probe的序列如SEQ ID NO:3所示，SEQ ID NO:1：5’-AAACTTCAGAGGAACATCAC-3’，SEQ ID NO:2：5’-CTGCTACACCCATAGAAAT-3’，SEQ ID NO:3：5’-TGAACCAAACATTCAATACAAACCAAG-3’；所述對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒NS基因的特異性引物對(duì)的上游引物NS-F序列如SEQ IDNO:4所示，下游引物NS-R序列如SEQ ID NO:5所示，探針NS-Probe序列如SEQ ID NO:6所示，SEQ ID NO:4：5’-TTCATCTACGAGAAGCCT-3’，SEQ ID NO:5：5’-CACATTCTGAAGTGAAGTCC-3’，SEQ ID NO:6：5’-CAATGAGAGAGCTGGAGTTGAGC-3’。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：探針HE-Probe的5’端和探針NS-Probe的5’端具有不同的熒光報(bào)告集團(tuán)。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，探針HE-Probe的5’端具有HEX熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端具有BHQ1熒光淬滅基團(tuán)，探針NS-Probe的5’端具有FMA熒光報(bào)告集團(tuán)，3’端具有BHQ1熒光淬滅基團(tuán)。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)的條件為：退火溫度為60℃，對(duì)應(yīng)鮭魚HE基因的特異性引物終濃度為0.5μmol/L，對(duì)應(yīng)鮭魚NS基因的特異性引物終濃度為0.45μmol/L，對(duì)應(yīng)鮭魚HE基因的探針終濃度為0.4μmol/L，對(duì)應(yīng)鮭魚NS基因的探針終濃度為0.4μmol/L。5.一種鑒定傳染性鮭魚貧血病毒的試劑盒，其特征在于，含有：對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒HE基因的特異性引物對(duì)和探針HE-Probe，對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒NS基因的特異性引物對(duì)和探針NS-Probe，所述對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒HE基因的特異性引物對(duì)的上游引物HE-F序列如SEQ IDNO:1所示，下游引物HE-R序列如SEQ ID NO:2所示，探針HE-Probe的序列如SEQ ID NO:3所示，SEQ ID NO:1：5’-AAACTTCAGAGGAACATCAC-3’，SEQ ID NO:2：5’-CTGCTACACCCATAGAAAT-3’，SEQ ID NO:3：5’-TGAACCAAACATTCAATACAAACCAAG-3’；所述對(duì)應(yīng)傳染性鮭魚貧血病毒NS基因的特異性引物對(duì)的上游引物NS-F序列如SEQ IDNO:4所示，下游引物NS-R序列如SEQ ID NO:5所示，探針NS-Probe序列如SEQ ID NO:6所示，SEQ ID NO:4：5’-TTCATCTACGAGAAGCCT-3’，SEQ ID NO:5：5’-CACATTCTGAAGTGAAGTCC-3’，SEQ ID NO:6：5’-CAATGAGAGAGCTGGAGTTGAGC-3’，探針HE-Probe的5’端具有HEX熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端具有BHQ1熒光淬滅基團(tuán)，探針NS-Probe的5’端具有FMA熒光報(bào)告集團(tuán)，3’端具有BHQ1熒光淬滅基團(tuán)。