本發明公開了一種同步檢測二十三種腦炎腦膜炎病原體的試劑盒及其檢測方法，該試劑盒包括DEPC水、5×RT緩沖液、反轉錄引物、反轉錄酶、X溶液、10×PCR緩沖液、PCR引物、25mM氯化鎂溶液、DNA聚合酶和陽性對照品，特點是反轉錄引物包括十二種腹腦炎腦膜炎病原體與人RNA內參的RT擴增引物，基因序列如SEQ ID NO.1～NO.13所示，PCR引物包括余下十一種腦炎腦膜炎病原體、人DNA內參、反應內參的正反向PCR擴增引物、十一種腹瀉RNA病毒與人RNA內參的PCR擴增引物，基因序列如SEQ ID NO.14～NO.52所示，優點是特異性強、靈敏度高、通量高、可靠性強、成本低、無假陰性結果。

1.一種同步檢測二十三種腦炎腦膜炎病原體的試劑盒，包括DEPC水、5×?RT?緩沖液、反轉錄引物、反轉錄酶、X?溶液、10×?PCR緩沖液、PCR?引物、25?mM?氯化鎂溶液、DNA聚合酶和陽性對照品，其特征在于：所述的反轉錄引物包括以下表中十二種腦炎腦膜炎病原體的RT擴增引物與人RNA內參的RT擴增引物，所述的PCR?引物包括表中余下十一種腦炎腦膜炎病原體的正反向PCR擴增引物、人DNA內參的正反向PCR擴增引物、反應內參的正反向PCR擴增引物以及上述十二種腦炎腦膜炎病原體的PCR擴增引物與人RNA內參的PCR擴增引物，基因序列如下表所示：其中所述的X溶液為包括三磷酸脫氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向擴增引物序列為AGGTGACACTATAGAATA；反向擴增引物序列為GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向擴增引物帶熒光標記。2.根據權利要求1所述的一種同步檢測二十三種腦炎腦膜炎病原體的試劑盒，其特征在于：所述的陽性對照品為連接有設計上述二十三種腦炎腦膜炎病原體、RNA內參、DNA內參和反應內參的引物的基因保守序列的pMD18-T的克隆載體。