一種供體角膜多種病毒的熒光定量PCR檢測試劑盒及檢測方法。試劑盒由RNA提取試劑、RNA反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增試劑和陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品組成。其中RNA反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增試劑包括2X反轉(zhuǎn)錄PCR預(yù)混試劑，聚合酶，反轉(zhuǎn)錄酶，正、反向HCV引物、HIV1引物和RV引物，以及HCV、HIV1與RV熒光探針，HCV、HIV1與RV陰性和陽性對照；陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品分別為含有HCV正、反向引物擴(kuò)增的目的序列的pUC57-HCV質(zhì)粒，以及HIV1正、反向引物擴(kuò)增的目的序列的pUC57-HIV1質(zhì)粒和RV正、反向引物擴(kuò)增的目的序列的pUC57-RV質(zhì)粒。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了對臨床供體結(jié)膜組織標(biāo)本的完全閉管檢測，不需PCR后處理，避免了交叉污染；同時(shí)采用實(shí)時(shí)檢測，所得Ct值和原始模板數(shù)量完全呈線性相關(guān)，定量準(zhǔn)確率極高，相對誤差約為50％，足以適應(yīng)臨床核酸定量的要求。

1.一種供體角膜多種病毒的熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于
試劑盒由RNA提取試劑、RNA反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增試劑和陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品組成；
其中RNA提取試劑為NucleoSpin?RNA?II試劑盒；RNA反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增試
劑包括2X反轉(zhuǎn)錄PCR預(yù)混試劑，Taq?DNA聚合酶，反轉(zhuǎn)錄酶，正向及
反向HCV引物，HCV熒光探針，正向及反向HIV1引物，HIV1熒光探針，
正向及反向RV引物，RV熒光探針，無核酸酶的蒸餾水，HCV陰性對照，
HCV陽性對照，HIV1陰性對照，HIV1陽性對照，RV陰性對照，RV陽
性對照；陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品分別為含有HCV正向和反向引物擴(kuò)增的目的序
列的pUC57-HCV質(zhì)粒，含有HIV1正向和反向引物擴(kuò)增的目的序列的
pUC57-HIV1質(zhì)粒，含有RV正向和反向引物擴(kuò)增的目的序列的pUC57-RV
質(zhì)粒；上述的HCV、HIV1或RV的引物、熒光探針與陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品序
列如下：
HCV：
正向HCV引物：CTCCCGGGAGAGCCATAGT
反向HCV引物：CAAGCACCCTATCAGGCAGTA
HCV熒光探針序列：FAM+CGGAACCGGTGAGTACACCGGA+TAMRA
HCV擴(kuò)增片段長度為182bp；
HCV陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的序列為：
ttagtatgagtgtcgtgcagcctccaggaccccccctcccgggagagccatagtggtctgcggaaccggtgag
tacaccggaattgccaggacgaccgggtcctttcttggataaacccgctcaatgcctggagatttgggcgtgccc
ccgcaagactgctagccgagtagtgttgggtcgcgaaaggccttgtggtactgcctgatagggtgcttgcgagt
gccccgggaggtctcgta
HCV陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的基因的片段長度為240bp；
HIV1：
正向HIV1引物：CCGGCCATAAGGCAAGAGT
反向HIV1引物：TCTCTGCATCATTATGGTAGCTGAA
HIV1熒光探針序列：
FAM+TGGCTGAAGCAATGAGCCAAGTAAC+TAMRA
HIV1擴(kuò)增片段長度為74bp；
HIV1陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的序列為：
attgtaagactattttaaaagcattgggaccagcggctacactagaagaaatgatgacagcatgtcagggagtag
gaggacccggccataaggcaagagttttggctgaagcaatgagccaagtaacaaattcagctaccataatgatg
cagagaggcaattttaggaaccaaagaaagattgttaagtgtttcaattgtggcaaagaagggcacacagccag
aaattgcagggccccta
HIV1陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的基因的片段長度為240bp；
RV：
正向RV引物：CAGATCCCTAAATGCAACGGTTA
反向RV引物：CCCAGATAGCCCCCTAGAACA
RV熒光探針序列：FAM+TGCTGCATGTGCTCCTCATGA+TAMRA
RV擴(kuò)增片段長度為72bp；
RV陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的序列為：
atctccttattcatcaaatgctgttggtcacgtgttcaatctcattcactttgtaggatgctatatgggtcaagtcagat
ccctaaatgcaacggttattgctgcatgtgctcctcatgaaatgtctgttctagggggctatctgggagaggaattc
ttcgggaaagggacatttgaaagaagattcttcagagatgagaaagaacttcaagaatacgaggcggctgaact
gac?aaagac
RV陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的基因的片段長度為240bp。
2.權(quán)利要求1的試劑盒應(yīng)用于臨床眼庫供體少量結(jié)膜組織標(biāo)本HCV、
HIV1和RV的檢測。