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血漿DNA的建庫方法和建庫試劑盒

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-09-06
  • 技術(shù)成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201910229527.4 
  • 技術(shù)(專利)名稱 血漿DNA的建庫方法和建庫試劑盒 
  • 項目單位 納昂達(dá)(南京)生物科技有限公司
  • 發(fā)明人 唐守運,曲艷,汪彪,胡玉剛,鄭文莉,吳強(qiáng) 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學(xué)藥品
  • 技術(shù)成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 鄭文嬌
  • 發(fā)布時間 2021-09-06  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明提供了一種血漿DNA的建庫方法和建庫試劑盒。其中,該建庫方法包括:對血漿DNA進(jìn)行末端修復(fù)及加A,得到修復(fù)DNA;采用帶有唯一標(biāo)簽序列的接頭對修復(fù)DNA依次進(jìn)行接頭連接和PCR擴(kuò)增,得到血漿DNA的測序文庫。通過采用帶有唯一標(biāo)簽序列的接頭對修復(fù)加A后的血漿DNA進(jìn)行接頭連接進(jìn)而構(gòu)建成血漿DNA的測序文庫,這樣形成的文庫便于在后期對測序數(shù)據(jù)分析的時候,根據(jù)唯一標(biāo)簽序列將建庫擴(kuò)增或測序擴(kuò)增所產(chǎn)生的重復(fù),與血漿DNA中真實的重復(fù)片段區(qū)分出來,進(jìn)而去除擴(kuò)增重復(fù)而保留血漿碎片DNA本身存在的重復(fù),使得來源于血漿DNA的有效數(shù)據(jù)量得以提升,從而一定程度上提高了血漿DNA的建庫效率。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種基于MGI測序平臺的血漿DNA的建庫方法,其特征在于,所述建庫方法包括:對血漿DNA進(jìn)行末端修復(fù)及加A,得到修復(fù)DNA;采用帶有唯一標(biāo)簽序列的接頭對所述修復(fù)DNA依次進(jìn)行接頭連接和PCR擴(kuò)增,得到所述血漿DNA的測序文庫;所述帶有唯一標(biāo)簽序列的接頭采用A1所示的第一Y接頭和B1所示的第二Y接頭的混合接頭;A1:第一Y接頭 B1:第二Y接頭 其中,N為A、T、C或G,所述第一Y接頭中的NNNNN序列與所述第二Y接頭中的NNNNNN序列均代表所述唯一標(biāo)簽序列;所述唯一標(biāo)簽序列包括下表1所示的16個所述第一Y接頭的5bp標(biāo)簽序列和16個所述第二Y接頭的6bp標(biāo)簽序列:表1: 接頭序號 5bp標(biāo)簽序列 接頭序號 6bp標(biāo)簽序列 MGI-5bp-1 5'Phos-GCTAG-3' MGI-6bp-1 5'Phos-GACGAT-3' MGI-5bp-2 5'Phos-GAGCA-3' MGI-6bp-2 5'Phos-GCTCTT-3' MGI-5bp-3 5'Phos-AGCGT-3' MGI-6bp-3 5'Phos-CGGAAT-3' MGI-5bp-4 5'Phos-CTCCA-3' MGI-6bp-4 5'Phos-GCATGA-3' MGI-5bp-5 5'Phos-TGGAC-3' MGI-6bp-5 5'Phos-CATCAC-3' MGI-5bp-6 5'Phos-CAAGC-3' MGI-6bp-6 5'Phos-GACATC-3' MGI-5bp-7 5'Phos-TCGTG-3' MGI-6bp-7 5'Phos-CTAGTC-3' MGI-5bp-8 5'Phos-GTACG-3' MGI-6bp-8 5'Phos-CGATCG-3' MGI-5bp-9 5'Phos-CGAGT-3' MGI-6bp-9 5'Phos-CATTGC-3' MGI-5bp-10 5'Phos-GCACT-3' MGI-6bp-10 5'Phos-CTGATG-3' MGI-5bp-11 5'Phos-TACCG-3' MGI-6bp-11 5'Phos-CAACTG-3' MGI-5bp-12 5'Phos-GTCAG-3' MGI-6bp-12 5'Phos-CTCTGT-3' MGI-5bp-13 5'Phos-GACTC-3' MGI-6bp-13 5'Phos-GCCTAT-3' MGI-5bp-14 5'Phos-TGTCC-3' MGI-6bp-14 5'Phos-GCCTTA-3' MGI-5bp-15 5'Phos-ACCGA-3' MGI-6bp-15 5'Phos-GCGTAA-3' MGI-5bp-16 5'Phos-AGGGA-3' MGI-6bp-16 5'Phos-GTAACC-3'
    。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建庫方法,其特征在于,對末端修復(fù)后的所述血漿DNA進(jìn)行接頭連接后,所述PCR擴(kuò)增,得到所述血漿DNA的測序文庫的步驟包括:對接頭連接后的所述血漿DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到線性文庫;對所述線性文庫進(jìn)行連接環(huán)化,得到所述血漿DNA的測序文庫。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建庫方法,其特征在于,對所述線性文庫進(jìn)行連接環(huán)化的步驟中,采用成環(huán)陪伴序列以及Taq DNA連接酶進(jìn)行所述連接環(huán)化。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建庫方法,其特征在于,所述連接環(huán)化進(jìn)行1~5次。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建庫方法,其特征在于,對血漿DNA進(jìn)行末端修復(fù)及加A的步驟中,采用末端修酶進(jìn)行所述末端修復(fù),所述修復(fù)酶包括T4 DNA聚合酶和Kelnow酶,其中,在單個反應(yīng)中,所述T4 DNA聚合酶的用量為1U~3U。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的建庫方法,其特征在于,在單個反應(yīng)中,所述T4 DNA聚合酶的用量為1U~1.5U。7.一種基于MGI測序平臺的血漿DNA的建庫試劑盒,所述試劑盒包括帶有唯一標(biāo)簽序列的接頭,所述帶有唯一標(biāo)簽序列的接頭為A1所示的第一Y接頭和B1所示的第二Y接頭的混合接頭;A1:第一Y接頭 B1:第二Y接頭 其中,N為A、T、C或G,所述第一Y接頭中的NNNNN序列與所述第二Y接頭中的NNNNNN序列均代表所述唯一標(biāo)簽序列;所述唯一標(biāo)簽序列包括表1所示的16個所述第一Y接頭的5bp標(biāo)簽序列和16個所述第二Y接頭的6bp標(biāo)簽序列。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括成環(huán)陪伴序列和TaqDNA連接酶。
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專利技術(shù)附圖

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