本發明涉及檢測鈉/鉀離子比的方法和試劑盒以及系統。本發明涉及檢測溶液中鈉/鉀離子摩爾比的方法，包括：（1）配制鈉/鉀離子比不同的多個溶液樣本，其中每個所述溶液樣本中含有相同濃度的菁染料及在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結構的DNA分子；（2）檢測采集波長處的熒光強度值；（3）以各個所述溶液樣本的鈉/鉀比作為橫坐標或縱坐標，以步驟（2）中測得的采集波長處的熒光強度值為縱坐標或橫坐標作圖，從而獲得鈉鉀離子比的標準曲線；（4）在待測液體樣品中加入所述的DNA分子，并調節pH值，從而得到測試溶液；（5）檢測波長在所述采集波長處的熒光強度值；（6）在鈉/鉀離子比標準曲線中找到對應的測試溶液的鈉/鉀比值。

1.一種檢測液體樣品中鈉/鉀離子比的方法，所述方法包括以下步驟：
(1)用pH6.2～8.2的緩沖溶液和可溶性鈉鹽和鉀鹽配制鈉/鉀離子比不同的多個溶液樣
本，其中每個所述溶液樣本中含有相同濃度的菁染料及在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不
同G-四鏈體結構的DNA分子；并且所述的可溶性鈉鹽和鉀鹽配制鈉/鉀離子比不同的多個溶
液樣本中鈉離子和鉀離子的濃度是變化的；
(2)將所述多個溶液樣本置于熒光光譜儀下，采用540nm至570nm的激發波長，檢測
采集波長處的熒光強度值；
(3)以各個所述溶液樣本的鈉/鉀比作為橫坐標或縱坐標，以步驟(2)中測得的采集波
長處的熒光強度值為縱坐標或橫坐標作圖，從而獲得鈉鉀離子比的標準曲線；
(4)在待測液體樣品中加入所述的DNA分子，并調節pH值，以使待測液體樣品中的
菁染料和DNA分子的濃度以及pH值與步驟(1)中的溶液樣本一致，從而得到測試溶液；
(5)將步驟(4)中獲得的測試溶液置于熒光光譜儀下，采用與步驟(2)中相同的激發
波長，檢測波長在所述采集波長處的熒光強度值；
(6)利用步驟(5)中測試溶液中測得的熒光強度值在步驟(3)中獲得的鈉/鉀離子比
標準曲線中找到對應的測試溶液的鈉/鉀比值；
其中所述采集波長在570nm至700nm的范圍內。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈
體結構的DNA分子為分子序列中含有下式I的結構的DNA分子：
GGYGGZGGMGG
式I
其中：Y、Z和M獨立地代表一個或多個任意堿基，G代表鳥嘌呤堿基。
3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-
四鏈體結構的DNA分子的序列選自以下序列：TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、
AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、TTGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGA、
TGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAA、AGGGAGGGCGCTGGGAGGAGGG、
GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG、GGTTGGTGTGGTTGG、
TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG、GGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG或
GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG。
4.如權利要求1或2所述的方法，其中所述菁染料為式II的化合物，

其中：R₁為C₁-C₆的烷基、苯基、烷基取代的苯基；R₂、R₃、R₄和R₅獨立地選自H
或C₁-C₆的烷基，或者R₂和R₃與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環結構，或
者R₄和R₅與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環結構；R₆和R₇為C₁-C₆烷基
或者磺酸基取代的C₁-C₆烷基；Y為反離子，根據R₆和R₇所帶電荷的不同而不同，若
R₆和R₇為烷基，則Y為鹵素陰離子；若R₆和R₇只有一個帶有磺酸根，則無需Y作為
反離子；若R₆和R₇均帶有磺酸根，則Y為三乙胺陽離子；X₁，X₂獨立地選自C、O、S、
Se或Te。
5.如權利要求4所述的方法，其中所述C₁-C₆的烷基選自甲基、乙基、正丙基、異
丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基或異己基。
6.如權利要求4所述的方法，其中R₁選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、
異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基、異己基、苯基、甲基苯基或二甲基苯基；R₂、
R₃、R₄和R₅獨立地選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、
異戊基、正己基或異己基。
7.如權利要求4所述的方法，其中所述5元至7元環結構為含有或不含有N或S原
子的飽和或不飽和環結構。
8.如權利要求4所述的方法，其中Y選自氟、氯、溴、碘陰離子或三乙胺陽離子。
9.如權利要求1或2所述的方法，其中所述緩沖溶液選自三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩
沖液、硼酸-硼砂緩沖液、三乙醇胺緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、雙甘氨肽緩沖液、2-氨基
-2-甲基-1-丙醇緩沖液、磷酸鈉-磷酸氫鈉緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、檸檬酸-檸檬酸
鈉緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液或磷酸鈉緩沖液。
10.如權利要求1或2所述的方法，其中所述溶液樣本中鈉/鉀離子比的范圍優選在
0至10的范圍；所述在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結構的DNA分子
在溶液樣本中的濃度在0.5至30μmol/L的范圍；所述菁染料在溶液樣本中的濃度在1至
30μmol/L的范圍。
11.一種檢測液體樣品中鈉/鉀離子比的試劑盒，所述試劑盒包括：pH6.2～8.2的緩沖
液、可溶性鈉鹽、鉀鹽、在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結構的DNA
分子和菁染料；
其中，pH6.2～8.2的緩沖溶液和可溶性鈉鹽和鉀鹽配制成鈉/鉀離子比不同的多個溶液樣
本，所述多個溶液樣本中含有相同濃度的菁染料及在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-
四鏈體結構的DNA分子；并且所述的可溶性鈉鹽和鉀鹽配制鈉/鉀離子比不同的多個溶液樣
本中鈉離子和鉀離子的濃度是變化的；
所述多個溶液樣本置于熒光光譜儀下，采用540nm至570nm的激發波長，檢測采集波
長處的熒光強度值；
以各個所述溶液樣本的鈉/鉀比作為橫坐標或縱坐標，所述檢測采集波長處的熒光強度值
為縱坐標或橫坐標作圖，從而獲得鈉鉀離子比的標準曲線；
在待測液體樣品中加入所述的DNA分子，并調節pH值，以使待測液體樣品中的菁染
料和DNA分子的濃度以及pH值與溶液樣本一致，從而得到測試溶液；
將獲得的測試溶液置于熒光光譜儀下，采用與所述激發波長相同的激發波長，檢測波長
在所述采集波長處的熒光強度值；
利用測試溶液中測得的熒光強度值在鈉/鉀離子比標準曲線中找到對應的測試溶液的鈉/
鉀比值；
其中，所述采集波長在570nm至700nm的范圍內。
12.如權利要求11所述的試劑盒，其中所述在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同
G-四鏈體結構的DNA分子為分子序列中含有下式I的結構的DNA分子：
GGYGGZGGMGG
式I
其中：Y、Z和M獨立地代表一個或多個任意堿基，G代表鳥嘌呤堿基。
13.如權利要求11所述的試劑盒，其中所述在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同
G-四鏈體結構的DNA分子的序列選自以下序列：TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、
AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、TTGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGA、
TGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAA、AGGGAGGGCGCTGGGAGGAGGG、
GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG、GGTTGGTGTGGTTGG、
TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG、GGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG或
GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG。
14.如權利要求11所述的試劑盒，其中所述菁染料為式II的化合物，

其中：R₁為C₁-C₆的烷基、苯基、烷基取代的苯基；R₂、R₃、R₄和R₅獨立地選自H
或C₁-C₆的烷基，或者R₂和R₃與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環結構，或
者R₄和R₅與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環結構；R₆和R₇為C₁-C₆烷基
或者磺酸基取代的C₁-C₆烷基；Y為反離子，根據R₆和R₇所帶電荷的不同而不同，若
R₆和R₇為烷基，則Y為鹵素陰離子；若R₆和R₇只有一個帶有磺酸根，則無需Y作為
反離子；若R₆和R₇均帶有磺酸根，則Y為三乙胺陽離子；X₁，X₂獨立地選自C、O、S、
Se或Te。
15.如權利要求14所述的試劑盒，其中所述C₁-C₆的烷基選自甲基、乙基、正丙基、
異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基或異己基。
16.如權利要求14所述的試劑盒，其中R₁選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁
基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基、異己基、苯基、甲基苯基或二甲基苯基；
R₂、R₃、R₄和R₅獨立地選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、
戊基、異戊基、正己基或異己基。
17.如權利要求14所述的試劑盒，其中所述5元至7元環結構為含有或不含有N或
S原子的飽和或不飽和環結構。
18.如權利要求14所述的試劑盒，其中Y選自氟、氯、溴、碘陰離子或三乙胺陽離
子。
19.如權利要求11所述的試劑盒，其中所述緩沖液選自三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖
液、硼酸-硼砂緩沖液、三乙醇胺緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、雙甘氨肽緩沖液、2-氨基-2-
甲基-1-丙醇緩沖液、磷酸鈉-磷酸氫鈉緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉
緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液或磷酸鈉緩沖液。
20.一種檢測液體樣品中鈉/鉀離子比的系統，包括如權利要求11至19中任一項所
述的試劑盒以及熒光光譜儀。