本發明公開了一種肝癌相關的TM4SF1基因和NPY基因啟動子區特異性位點甲基化水平的試劑盒及其應用，特點是利用一種焦磷酸測序法定量檢測肝癌相關的TM4SF1基因位點cg06800962和NPY基因位點cg05158615的甲基化水平。設計了獨有引物，每個基因的引物包括上、下游PCR擴增引物和焦磷酸測序引物，并且其中一條擴增引物帶生物素標記。本發明在原發性肝細胞癌患者中篩查TM4SF1基因和NPY基因的特異性位點，發現兩位點甲基化水平在癌與癌旁組織中存在顯著性差異。

1.一種針對肝癌相關的TM4SF1基因啟動子區特異性甲基化位點cg06800962的焦磷酸測序PCR上、下游引物和甲基化測序引物在制備輔助檢測和診斷原發性肝細胞癌的試劑盒中的應用。2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，PCR上游引物序列如SEQ ID NO.1所示：5′-GAGAAGGTTGTTGGGAAAATTATAGA-3′；下游引物序列如SEQ ID NO.2所示：biotin-5′-CCAACCTTTCTAAACCCTTTATATTAACT-3；甲基化測序引物序列如SEQ ID NO.3所示：5′-TGTTTATAGTAAGTTTTGTAGG-3′。3.一種針對肝癌相關的NPY基因啟動子區特異性甲基化位點cg05158615的焦磷酸測序PCR上、下游引物和甲基化測序引物在制備輔助檢測和診斷原發性肝細胞癌的試劑盒中的應用。4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，PCR上游引物序列如SEQ ID NO.4所示：5′-AGGGTAGATATTTGGGTTTTGG-3′；下游引物序列如SEQ ID NO.5所示：biotin-5′-AACCCTCCCCCCCCAAACACTA-3′；甲基化測序引物序列如SEQ ID NO.6所示：5′-ATATTTGGGTTTTGGTG-3′。