本發明提供了一種用于PCR擴增的引物、試劑盒、檢測MSI狀態的方法及應用。該引物包括目標序列擴增區域和設置在目標序列擴增區域3’末端的封閉區域，封閉區域具有R(D)n1DsDsDx或R(D)n2DsDsMx所示結構，其中，R表示RNA堿基，D表示互補配對堿基，M表示錯配堿基，n1和n2表示括號中D堿基的個數，n1為1或2，n2為2，s表示相鄰的兩個核苷酸之間的3’氧原子進行硫代修飾，x表示封閉修飾。最后三個堿基間的硫代連接防止末端帶封閉修飾的堿基被酶切掉，故可采用高保真酶擴增，且既能保證擴增的準確性，又不產生非特異擴增和引物二聚體，從而提高了MSI狀態檢測的準確性。

1.一種用于PCR擴增的引物組合，其特征在于，所述引物組合為SEQ ID NO:70至SEQ IDNO:207所示的引物的組合。2.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：權利要求1所述的引物組合。3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括測序平臺接頭通用引物。4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述通用引物為SEQ ID NO:208和SEQID NO:209所示的MGI測序平臺的通用引物，或者，所述通用引物為SEQ ID NO:210和SEQ IDNO:211所示的Illumina測序平臺的通用引物。5.一種非診斷目的的檢測MSI狀態的方法，所述方法包括對目標MSI位點進行PCR擴增檢測的步驟，其特征在于，采用權利要求1所述的引物組合進行擴增；或者采用權利要求3或4所述的試劑盒進行擴增。6.權利要求1所述的引物組合在制備檢測MSI狀態的試劑盒中的應用。7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述試劑盒為擴增子文庫構建試劑盒。