1.一種用于鑒定轉基因甘蔗紅糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1，從樣品中提取DNA，每5g紅糖按如下方式提取：
稱取紅糖5g，置于50ml的離心管中，加入20ml的CTAB裂解液，65℃溫浴溶解1小時，期間
進行兩到三次的漩渦震蕩處理；冷卻 后，加入20ml氯仿/異戊醇(24:1)，搖晃震蕩均勻后，
12000rpm離心10min，用5ml的移液槍頭深入離心管底部，吸棄底層液相，再加入20ml氯仿/
異戊醇(24:1)進行抽提，如此反復2-3次；最后吸取上層水相至另一干凈的離心管內，加入
等體積預冷的異丙醇，-20℃沉淀30-60min，12000rpm離心10min，倒掉上清后，沉淀加20ml
水再次溶解，加1/10體積的NaAc，再次加入等體積預冷的異丙醇，-20℃沉淀30-60min，沉淀
再次用900ul的水進行溶解，并轉移至2ml的離心管內，加1/10體積的NaAc及等體積預冷的
異丙醇，-20℃沉淀30-60min，沉淀吹干后溶解于50-100ul的水或TE中；
步驟2，用引物組合物進行熒光定量PCR擴增，得到擴增產物；其中，所述引物組合物包
括第一引物組和第二引物組，所述第一引物組為擴增甘蔗內源基因ShSAP1的引物對，所述
第二引物組由擴增甘蔗外源基因35S的引物對、擴增甘蔗外源基因tNOS的引物對、擴增甘蔗
外源基因CP4-EPSPS的引物對、擴增甘蔗外源基因Cry1Ab的引物對、擴增甘蔗外源基因
Vip3Aa的引物對和擴增甘蔗外源基因Bar的引物對組成，其中，
擴增甘蔗內源基因ShSAP1的引物對的正向引物的序列如SEQ ID NO：1所示，反向引物
的序列如SEQ ID NO：2所示；
擴增甘蔗外源基因35S的引物對的正向引物的序列如SEQ ID NO：3所示，反向引物的序
列如SEQ ID NO：4所示；
擴增甘蔗外源基因tNOS的引物對的正向引物的序列如SEQ ID NO：5所示，反向引物的
序列如SEQ ID NO：6所示；
擴增甘蔗外源基因CP4-EPSPS的引物對的正向引物的序列如SEQ ID NO：7所示，反向引
物的序列如SEQ ID NO：8所示；
擴增甘蔗外源基因Cry1Ab的引物對的正向引物的序列如SEQ ID NO：9所示，反向引物
的序列如SEQ ID NO：10所示；
擴增甘蔗外源基因Vip3Aa的引物對的正向引物的序列如SEQ ID NO：11所示，反向引物
的序列如SEQ ID NO：12所示；
擴增甘蔗外源基因Bar的引物對的正向引物的序列如SEQ ID NO：13所示，反向引物的
序列如SEQ ID NO：14所示；
步驟3，檢測擴增產物，并作出判斷。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3具體為：根據第一引物組擴增的Ct
值，擴增曲線，溶解曲線，判斷是否從紅糖中提取出了可供熒光定量PCR檢測的DNA；再根據
第二引物組的擴增曲線Ct大小，溶解曲線是否與陽性對照一致，判斷是否為轉基因甘蔗紅
糖；其中，在檢測過程中均須設置陽性對照和陰性對照。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，待檢測的紅糖樣品的Ct值在37以內，且擴
增產物的溶解曲線與正對照的溶解曲線一致時，則判斷該檢測樣品為轉基因甘蔗紅糖。
4.根據權利要求1-3中任意一項所述的方法，其特征在于，引物的退火溫度為60±2℃，
且擴增產物為短片段80-120bp。
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