本發(fā)明公開了一種特異、敏感、重復(fù)性好、快速、費(fèi)用低廉的甲型流感病毒、H1N1及H3N2亞型流感病毒檢測方法及檢測試劑盒。本發(fā)明根據(jù)GeneBank中公布的Influenza A Viruse(H1N1)virus 2009年北美變異株M基因、HA基因序列和Influenza A Viruse(H3N2)流行株的HA基因序列，通過序列比對(duì)尋找高度保守的區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針，研制檢測方法中的關(guān)鍵試劑——探針、引物和陽性對(duì)照(構(gòu)建甲型流感病毒及H1N1和H3N2亞型流感病毒基因重組克隆質(zhì)粒)，經(jīng)各反應(yīng)條件的優(yōu)化和特異性、敏感性和重復(fù)性試驗(yàn)，建立了甲型流感病毒及H1N1和H3N2亞型流感病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測方法，一次試驗(yàn)即可同時(shí)特異性地檢測甲型流感病毒、H1N1亞型流感病毒和H3N2亞型流感病毒。

1.一種用于檢測甲型流感病毒、H1N1及H3N2亞型流感病毒的試劑盒，其特
征在于，該試劑盒中的熒光RT-PCR反應(yīng)液組份及濃度為：

所述各引物P1、各引物P2及各探針Probe的具體的核苷酸序列如下：
A型流感病毒：P1?5’-CCTCTGACTAAGGGAATTTTAGGAT-3’
?????????????P2?5’-GCTGCAGTCCTCGCTCACT-3’
?????????????Probe?Fam-5’-TGTGTTCACGCTCACCGTGCC-3’-Eclipse
A型流感病毒H1N1亞型：
?????????????P15’-CCCCATTGCATTTGGGTAAA-3’
?????????????P25’-TGGAGAGTGATTCAACCTCTGGAT-3’
?????????????Probe?Hex-5’-TAACATTGCTGGCTGGATCCTGGGA-3’-Eclipse
A型流感病毒H3N2亞型：
?????????????P1?5’-CTGGATCCTGTGGATTTCCTTT-3’
?????????????P25’-TGATGAACCCCAGCAAAACA-3’
?????????????Probe?Rox-5’-CATATCATGCTTTTTGCTTTGTG-3’-Eclipse。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，熒光RT-PCR反應(yīng)液組份及濃
度為：

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對(duì)
照液和陰性對(duì)照液。