1.能夠檢測1型鴨甲肝病毒和3型鴨甲肝病毒的兩個引物對,其特征
在于,引物對1由引物1和引物2組成,用于檢測1型鴨甲肝病毒,它們的核苷
酸序列分別依次為SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所示的單鏈DNA;引物
對2由引物3和引物4組成,用于檢測3型鴨甲肝病毒,它們的核苷酸序列分別
依次為SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4所示的單鏈DNA。
2.1型鴨甲肝病毒和3型鴨甲肝病毒一步法雙重RT-PCR檢測試劑盒,
其特征在于,在本試劑盒中包括彼此獨立分裝的以下各組分:
其中PrimeScript?1?Step?Enzyme?Mix由
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RTase、
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HS、RNase?Inhibitor以及One?Step?RT-PCR用穩定劑配制,2×1Step?Buffer由
Buffer、dNTP以及One?Step?Enhancer?Solution配制,具體配比參照寶生物工程(大
連)有限公司的
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One?Step?RT-PCR?Kit?Ver.2(Dye?Plus),上述劑量為
100次量。
3.應用權利要求2所述檢測試劑盒檢測1型鴨甲肝病毒和3型鴨甲肝
病毒的多重PCR檢測方法,其特征在于,用于非診斷性目的的檢測,引物1在
所述PCR試劑中的終濃度具體為0.2umol/L;引物2在所述PCR試劑中的終
濃度具體為0.2umol/L;引物3在所述PCR試劑中的終濃度具體為0.4umol/L;
引物4在所述PCR試劑中的終濃度具體為0.4umol/L;RT-PCR的反應條件為
50℃反轉錄30分鐘,94℃變性2分鐘;然后進入變性94℃30秒,45℃梯度退
火20秒,每循環一次升高2℃,72℃延伸2分鐘的循環,共進行8個循環;
然后進入變性94℃30秒,55℃退火20秒,72℃延伸2分鐘的循環,共進行
25個循環;最后再經72℃延伸10分鐘后,于4℃結束反應。