本發明公開了一種檢測牛肉中瘋牛病特殊風險物質的核苷酸序列、方法及試劑盒，屬于檢驗檢疫領域。一組檢測牛肉中瘋牛病特殊風險物質的核苷酸序列，具有序列表SEQ ID No.1至SEQ ID No.3所示的堿基序列。本發明的優點在于：通過檢測牛肉中有無GFAP mRNA，可以判斷該批牛肉是否被瘋牛病特殊風險物質所污染。與傳統ELISA技術相比，該方法更加敏感、快速、穩定性更好。敏感性實驗結果表明，該技術可以檢測到牛肉中含有0.001％的中樞神經組織。穩定性實驗結果表明，牛肉在室溫(夏天)存放4天、4℃存放2周、100℃加熱處理30min，不會影響檢測敏感性，穩定可靠。實驗全程只需要3個小時即可完成，而且可以對實驗過程進行適時監控。因而，更能滿足口岸快速、批量檢驗檢疫的需要。

1.一種檢測牛肉中瘋牛病特殊風險物質的方法，其特征在于：以中樞神經組織的標記物GFAP?mRNA為靶目標進行檢測；所述以中樞神經組織的標記物GFAP?mRNA為靶目標進行檢測使用的上游引物的堿基序列如SEQ?ID?No.1所示，使用的下游引物的堿基序列如SEQ?ID?No.2所示，使用的探針的堿基序列如SEQ?ID?No.3所示，所述探針的5’端標記FAM，3’端標記MGB；所述方法為RT-PCR法，包括如下步驟：(1)提取待檢物的RNA；(2)檢測待檢物的GFAP?mRNA：反應體系：??25μl上游引物????0.5ul(10pmol/μl)下游引物????0.5ul(10pmol/μl)探針????????0.25ul(10pmol/μl)10×buffer??1.25uldNTP????????1.25ulMg²⁺????????3ulTaq?????????0.25ul反轉錄酶磁珠????1個磁珠/5個反應H₂O?????????????15ulRNA模板??????????3ul反應條件：第一階段：反轉錄反應，42℃，30min；第二階段：預變性94℃，3min；第三階段：94℃，10s45℃，30s72℃，1min，5個循環；第四階段：94℃，10s60℃，30s，40個循環熒光收集設置在第四階段每次循環的退火延伸時進行；第五階段：40℃，1min??降溫(3)繪制標準曲線：將提取的RNA從1∶10開始進行10倍梯度稀釋，分別以稀釋倍數的負對數為橫坐標、以CT值為縱坐標，繪制標準曲線，求出相關性系數；(4)對結果進行判定：讀取檢測結果，閾值設定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照品擴增曲線的最高點，結果顯示陰性為準。