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一種融合蛋白及其用于檢測莢膜組織胞漿菌的用途

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-06
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200910042865.3 
  • 技術(專利)名稱 一種融合蛋白及其用于檢測莢膜組織胞漿菌的用途 
  • 項目單位 中南大學
  • 發明人 馮俊濤,余銘恩,李曉照,胡成平,顧其華 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 韓永軍
  • 發布時間 2021-09-06  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種融合蛋白、包含該蛋白的ELISA試劑盒及其用于檢測莢膜組織胞漿菌的用途,以分離的莢膜組織胞漿菌基因組DNA為模板,通過PCR方法擴增得到M基因片段和GH17基因片段;在原核表達載體中定向插入莢膜組織胞漿菌M基因片段和GH17基因片段,構建得到M-GH17基因片段重組原核表達載體;將M-GH17重組原核表達載體轉化宿主細胞,篩選重組單克隆,誘導后特異性表達,得到融合蛋白M-GH17;用該融合蛋白再進一步制備用于的檢測莢膜組織胞漿菌的ELISA試劑盒。用本發明的包含融合蛋白M-GH17的ELISA試劑盒,按照普通ELISA方法檢測待測血清,根據終止后的吸光值確定陽性、陰性、可疑的判斷臨界值,即可對待測血清樣本進行莢膜組織胞漿菌檢測。
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  • 02

    說明書

    1.一種莢膜組織胞漿菌融合蛋白M-GH17,其特征在于該融合蛋白是由如序列表SEQ?ID?No:3的氨基酸序列和SEQ?ID?No:4的氨基酸序列連接形成的多肽。2.一種編碼如權利要求1所述的融合蛋白M-GH17的DNA,其特征在于該DNA包含莢膜組織胞漿菌M基因片段和GH17基因片段,所述莢膜組織胞漿菌M基因片段的核苷酸序列如SEQ?ID?No:1所示,所述GH17基因片段如SEQ?IDNo:2所示。3.一種包含莢膜組織胞漿菌M基因片段和GH17基因片段并能融合表達如權利要求1所述蛋白M-GH17的重組大腸桿菌菌株。4.如權利要求1所述的融合蛋白M-GH17的制備方法,其特征在于包含以下步驟:以分離的莢膜組織胞漿菌基因組DNA為模板,通過PCR方法擴增得到M基因的特異性片段和GH17基因的特異性片段;在原核表達載體PET-28a(+)中定向插入莢膜組織胞漿菌M基因片段,構建得到M基因片段的重組原核表達載體;在該重組原核表達載體中再定向插入莢膜組織胞漿菌GH17基因片段,構建得到M-GH17基因片段重組原核表達載體;將M-GH17重組原核表達載體轉化宿主細胞,篩選重組單克隆,誘導后特異性表達,得到融合蛋白M-GH17。5.如權利要求4所述的方法,其特征在于:所述M-GH17重組原核表達載體轉化宿主細胞時,所述宿主細胞為大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞。6.如權利要求4所述的方法,其特征在于:從所述莢膜組織胞漿菌PCR擴增M基因片段所用的上游引物為:5′GCCATATGCCTCTAAACACGGCCGC?3′;下游引物為:5′GCGGATCCTTTGTTGTTGGCGCTGTTAA?3′。7.如權利要求4所述的方法,其特征在于:從所述莢膜組織胞漿菌PCR擴增GH17基因片段所用上游引物為:5′GCGAATTCGGCCAGGTTTGGGCG?3′;下游引物為:5′GCCTCGAGTTAATCGACCATGAAGCACCAC?3′8.一種用于莢膜組織胞漿菌鑒別診斷的ELISA試劑盒,包含常規ELISA試劑盒所用的包被液、封閉液、洗滌液、顯色液A、顯色液B、終止液,其特征在于:還包含如權利要求1所述的莢膜組織胞漿菌融合蛋白M-GH17,以及莢膜組織胞漿菌感染標準陽性血清和標準陰性血清。
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