1.一種甲基對(duì)硫磷半抗原的制備方法,其特征在于包括如下步驟:
a)把三氯硫磷放入單口瓶中攪拌,緩慢滴加與三氯硫磷摩爾比為1:4的無水甲醇,保持
溫度10℃,滴畢繼續(xù)反應(yīng)1h,用大量冷水洗滌,靜置分層,下層為目標(biāo)物,無水硫酸鎂干燥;
b)將摩爾比為1:3的對(duì)硝基苯酚與氫氧化鈉溶于體積比為1:3的水-二氯甲烷溶液中,加
入苯硫脲,攪拌20min,將其緩慢滴入含有O-甲基硫代磷酰二氯的單口瓶中,其中O-甲基硫
代磷酰二氯與對(duì)硝基苯酚的摩爾比為1:2,保持溫度10℃,反應(yīng)5h,將反應(yīng)液蒸干,柱層析
純化,得無色液體;
c)將摩爾比為1:2的3-巰基丙酸與氫氧化鈉溶于無水甲醇中,攪拌30min,將其滴入含
有O-甲基-O-(4-硝基苯)-硫代磷酰氯的單口瓶中,其中O-甲基-O-(4-硝基苯)-硫代磷酰
氯與巰基丙酸的摩爾比為1:1,保持10℃,滴畢繼續(xù)反應(yīng)5h,加入冷水,石油醚萃取出極性
小的雜質(zhì),將水相調(diào)pH至5左右,二氯甲烷萃取,無水硫酸鎂干燥,柱層析純化,得白色
固體,即為甲基對(duì)硫磷半抗原;所制備的甲基對(duì)硫磷半抗原分子結(jié)構(gòu)式為:
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2.一種甲基對(duì)硫磷抗原的制備方法,其特征在于包括如下步驟:
取甲基對(duì)硫磷半抗原充分溶解于N,N-二甲基甲酰胺中,得到溶液Ⅰ;稱取載體蛋白,使
之充分溶解在pH7.2的磷酸鹽緩沖液中,將溶液Ⅰ逐滴緩慢滴加到該載體蛋白溶液中,得到
溶液Ⅱ;稱取碳化二亞胺用水溶解后緩慢于室溫下加入溶液Ⅱ中,攪拌;用0.01mol/LPBS
透析3d,每天換2次透析液,以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì);以12000r/min離心30min,收集
上清,即得甲基對(duì)硫磷免疫原,分裝,于-20℃保存?zhèn)溆茫?br/>取甲基對(duì)硫磷半抗原用N,N-二甲基甲酰胺溶解,冷卻至10℃,加入氯甲酸異丁酯,10℃
攪拌反應(yīng),得到反應(yīng)液A;稱取載體蛋白,使之充分溶解在50mmol/L碳酸鈉溶液中,將反
應(yīng)液A逐滴緩慢滴加到該溶液中,10℃反應(yīng),然后4℃過夜;用0.01mol/LPBS透析3d,每
天換2次透析液,以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì);以12000r/min離心30min,收集上清,即得
甲基對(duì)硫磷包被原,分裝,于-20℃保存?zhèn)溆茫?br/>所制備的甲基對(duì)硫磷抗原分子結(jié)構(gòu)式為: