本發(fā)明公開了一種半抗原及其制備方法和應(yīng)用，具體涉及一種甲基對(duì)硫磷半抗原。本發(fā)明還公開了所述半抗原的制備方法及其應(yīng)用。基于甲基對(duì)硫磷半抗原建立的試劑盒快速檢測(cè)產(chǎn)品，使用方便、檢測(cè)成本低、檢測(cè)方法高效、準(zhǔn)確、快速、可同時(shí)檢測(cè)大批量的樣本，適用于玉米、蘋果樣本中甲基對(duì)硫磷殘留的現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大量樣本的篩查。

1.一種甲基對(duì)硫磷半抗原的制備方法，其特征在于包括如下步驟：
a)把三氯硫磷放入單口瓶中攪拌，緩慢滴加與三氯硫磷摩爾比為1:4的無水甲醇，保持
溫度10℃，滴畢繼續(xù)反應(yīng)1h，用大量冷水洗滌，靜置分層，下層為目標(biāo)物，無水硫酸鎂干燥；
b)將摩爾比為1:3的對(duì)硝基苯酚與氫氧化鈉溶于體積比為1:3的水-二氯甲烷溶液中，加
入苯硫脲，攪拌20min，將其緩慢滴入含有O-甲基硫代磷酰二氯的單口瓶中，其中O-甲基硫
代磷酰二氯與對(duì)硝基苯酚的摩爾比為1:2，保持溫度10℃，反應(yīng)5h，將反應(yīng)液蒸干，柱層析
純化，得無色液體；
c)將摩爾比為1:2的3-巰基丙酸與氫氧化鈉溶于無水甲醇中，攪拌30min，將其滴入含
有O-甲基-O-(4-硝基苯)-硫代磷酰氯的單口瓶中，其中O-甲基-O-(4-硝基苯)-硫代磷酰
氯與巰基丙酸的摩爾比為1:1，保持10℃，滴畢繼續(xù)反應(yīng)5h，加入冷水，石油醚萃取出極性
小的雜質(zhì)，將水相調(diào)pH至5左右，二氯甲烷萃取，無水硫酸鎂干燥，柱層析純化，得白色
固體，即為甲基對(duì)硫磷半抗原；所制備的甲基對(duì)硫磷半抗原分子結(jié)構(gòu)式為：

2.一種甲基對(duì)硫磷抗原的制備方法，其特征在于包括如下步驟：
取甲基對(duì)硫磷半抗原充分溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，得到溶液Ⅰ；稱取載體蛋白，使
之充分溶解在pH7.2的磷酸鹽緩沖液中，將溶液Ⅰ逐滴緩慢滴加到該載體蛋白溶液中，得到
溶液Ⅱ；稱取碳化二亞胺用水溶解后緩慢于室溫下加入溶液Ⅱ中，攪拌；用0.01mol/LPBS
透析3d，每天換2次透析液，以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì)；以12000r/min離心30min，收集
上清，即得甲基對(duì)硫磷免疫原，分裝，于-20℃保存?zhèn)溆茫?br/>取甲基對(duì)硫磷半抗原用N,N-二甲基甲酰胺溶解，冷卻至10℃，加入氯甲酸異丁酯，10℃
攪拌反應(yīng)，得到反應(yīng)液A；稱取載體蛋白，使之充分溶解在50mmol/L碳酸鈉溶液中，將反
應(yīng)液A逐滴緩慢滴加到該溶液中，10℃反應(yīng)，然后4℃過夜；用0.01mol/LPBS透析3d，每
天換2次透析液，以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì)；以12000r/min離心30min，收集上清，即得
甲基對(duì)硫磷包被原，分裝，于-20℃保存?zhèn)溆茫?br/>所制備的甲基對(duì)硫磷抗原分子結(jié)構(gòu)式為：