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室溫下快速識別柑橘病害生防菌株的解旋酶依賴性擴增反應裝置

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-08-06
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710077054.1 
  • 技術(專利)名稱 室溫下快速識別柑橘病害生防菌株的解旋酶依賴性擴增反應裝置 
  • 項目單位 江西農業大學
  • 發明人 劉冰,朱軍民,吳思夢,蔣軍喜 
  • 行業類別 醫療器械-醫療實驗室
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 王延嶺
  • 發布時間 2021-08-06  
  • 01

    項目簡介

    室溫下快速識別柑橘病害生防菌株的解旋酶依賴性擴增反應裝置,屬于植物病理學技術領域,由載玻片(1)、菌液腔(2)、儲液管(3)、顯示玻片(4)、牽拉活塞(5)、反應管(6)、阻液片(14)構成,其特征在于:所述的反應管(6)內部設置有牽拉活塞(5)和阻液片(14),兩側壁上開口有儲液管孔(17),上壁通過進液孔(13)和釋壓孔(15)與顯液腔(21)相通連;反應管腔(23)與菌液腔(2)、儲液管腔(19)、和顯液腔(21)相連通,最外端被牽拉支板(10)封堵;反應管壁(25)上有儲液管口(11)、進液孔(13)和釋壓孔(15)。該裝置制作簡單,可操作性強,成本低廉,效果明顯。
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  • 02

    說明書

    1.室溫下快速識別柑橘病害生防工程菌株ML27的裝置,由載玻片(1)、菌液腔(2)、儲液管(3)、顯示玻片(4)、牽拉活塞(5)、反應管(6)、阻液片(14)構成,其特征在于:所述的載玻片(1)是室溫下快速識別柑橘病害生防工程菌株ML27的裝置的骨架,玻璃質,長方體形,長度為10-15厘米,寬度為3-5厘米,厚度為1-5毫米,制作時先用模具采用槽沉成形法制成上下兩部分,然后再采用集中的高溫火焰對上下兩部分邊緣局部加熱,依靠表面張力的作用使玻璃邊緣在軟化時變得圓滑,同時將兩部分融合在一起,形成內部具管道的整體結構;所述的菌液腔(2)是盛放柑橘病害生防工程菌株ML27的空間,梭形囊狀,長度為0.5-1厘米,中央最粗橫截面橢圓形,橢圓的長向直徑為0.5-0.8厘米,橢圓的短向直徑為0.1-0.2厘米;菌液腔(2)在載玻片(1)上的開口稱為菌液腔口(7),菌液腔口(7)是將柑橘病害生防工程菌株ML27液體注入到菌液腔(2)中的入口,圓形,直徑為1-2毫米;菌液腔(2)另一端連通反應管(6),整個菌液腔(2)斜向位于載玻片(1)中,菌液腔(2)中軸與水平面呈20°-30°夾角;所述的儲液管(3)是儲存將柑橘病害生防工程菌株ML27細胞破裂和細胞中特異質粒DNA常溫PCR以及染色反應產物所需要的試劑的部件,共9個,依次設置在反應管壁(25)的兩側,從菌液腔(2)向顯示玻片(4)方向的儲液管(3)管內依次裝有10pmol引物1、10pmol引物2、100ngUvrD解旋酶、100ng DNA依賴性DNA聚合酶、400ng MutL蛋白、0.1-100mM的核苷三磷酸NTP10μl、1-10mM的脫氧核苷三磷酸dNTP10μl、1.2-12.5mM的二價鎂離子10μl和10μl核酸染料SYBR Green I;儲液管(3)的試劑與菌液接觸后能夠發生HDA解旋酶依賴性擴增反應,HDA反應是一種通過使用解旋酶制備物解開雙鏈核酸以生成擴增模板來擴增核酸的常溫PCR反應;每個儲液管(3)基部圓柱狀,直徑為0.5-3毫米,開口于載玻片(1)的側壁上,該開口稱為儲液管口(11);每個儲液管(3)端部圓臺形,圓臺形頂部開口為儲液管孔(17),儲液管(3)包括儲液管口(11)、儲液封堵(12)、儲液管孔封膜(16)、儲液管孔(17)、儲液管壁(18)和儲液管腔(19);儲液管口(11)是儲液管(3)在載玻片(1)的側壁上的開口;儲液封堵(12)油質,在反應液置入儲液管(3)后被注入儲液管(3),用于封堵儲液管(3)中的各種反應液,并且在牽拉活塞(5)抽吸時,能夠像圓珠筆芯內的封堵一樣,隨著反應液的移動而移動,使得反應液由于與外界隔絕而完全處于最初的無菌狀態,以免發生變質反應;操作時,首先在儲液管孔(17)外用蠟制成一個厚度為0.01-0.05毫米的薄膜,即儲液管孔封膜(16),封堵住儲液管孔(17),然后注入各自的試劑,注好后,接著注入油質的儲液封堵(12),即可使反應所需的試劑被儲存于不同的儲液管(3)中;儲液管孔封膜(16)蠟質,圓片狀,直徑為0.1-1毫米,厚度為0.01-0.05毫米;儲液管孔(17)直徑為0.1-1毫米,開口于反應管壁(25)處;儲液管腔(19)是儲液管(3)基部和端部內的空腔,基部圓柱狀,直徑為0.5-3毫米,端部圓臺形,直徑為0.1-1毫米;所述的顯示玻片(4)是柑橘病害生防工程菌株ML27細胞破裂和細胞中特異質粒DNA序列常溫PCR反應后,擴增的DNA與染色反應產物所需要的試劑發生反應,從進液孔(13)由于表面張力造成液體在顯液腔(21)迅速擴散,使得顏色顆粒彌散分布在顯液腔(21)內,從而呈現出藍色的結構,包括進液孔(13)、釋壓孔(15)、顯液腔(21)、顯示基片(22)、顯示頂片(24);顯示基片(22)是顯示玻片(4)下方的蓋玻片,長度為0.5-2厘米,寬度為0.5-1.5厘米,厚度為0.01-0.05毫米,一側向上凸起,凸起的長度為0.5-1.5厘米,寬度為0.01-0.05厘米,厚度為0.01-0.05毫米,在反應管(6)上方有兩個孔,接近儲液管(3)一側的孔為進液孔(13),接近牽拉支板(10)一側的孔為釋壓孔(15);進液孔(13)為圓孔,直徑為0.05-0.1厘米,高度為0.01-0.05毫米,是反應后液體進入顯液腔(21)的通道;釋壓孔(15)為圓孔,直徑為0.05-0.1厘米,高度為0.01-0.05毫米,是為反應后液體進入顯液腔(21)緩解空氣阻力的通道,反應后液體在顯液腔(21)中由于表面張力擴散的過程中,逐漸占據顯液腔(21)的空間,迫使里面原來的氣體被壓擠,從釋壓孔(15)進入反應管(6),并從牽拉索(9)與牽拉支板(10)中央圓孔之間的縫隙排出;顯示頂片(24)是顯示玻片(4)上方的蓋玻片,長度為0.5-2厘米,寬度為0.5-1.5厘米,厚度為0.01-0.05毫米,與顯示基片(22)一側向上凸起相對應的另一側也有一個凸起,顯示頂片(24)與顯示基片(22)上下之間和顯示頂片(24)與顯示基片(22)相對應的凸起之間所共同形成的空間為顯液腔(21);顯液腔(21)長度為0.48-1.9厘米,寬度為0.5-1.5厘米,高度為0.01-0.05毫米,是將顏色反應發生后將顏色顆粒分散從而使顏色能夠被肉眼看到的空間;牽拉活塞(5)設置在反應管(6)中,在手動牽拉牽拉索環(20)時,能夠將牽拉活塞頭(8)牽引拉動,使其在反應管(6)發生位移,是將菌液腔(2)中的菌液和儲液管(3)中的反應液抽吸到反應管腔(23)中形成混合液體,使混合液體發生反應的動力部件,包括牽拉活塞頭(8)、牽拉索(9)、牽拉支板(10)和牽拉索環(20);牽拉活塞頭(8)橡膠質,圓柱形,直徑為0.5-3毫米,長度為0.5-1毫米,牽拉活塞頭(8)底面中央固著有牽拉索(9),牽拉活塞頭(8)在反應管(6)發生位移時,能夠改變反應管(6)內的壓力,產生抽吸力量,將液體吸入反應管腔(23)中,同時,牽拉活塞頭(8)在移動過程中,還可以將儲液管孔封膜(16)從儲液管孔(17)處刮掉,以便儲液管腔(19)中的反應液被抽吸出來;牽拉索(9)由市售的釣魚線制成,橫截面圓形,直徑為0.1-0.5毫米,與牽拉支板(10)中央的圓孔和阻液片(14)中央的圓孔之間有寬度為0.4-0.5毫米的縫隙,一端固定在牽拉活塞頭(8)底面中央,另一端形成牽拉索環(20),供使用者伸進手指牽拉牽拉活塞(5),使其在反應管(6)移動;牽拉索環(20)環形,環形直徑為3-5厘米;牽拉支板(10)圓片狀,直徑為1-5毫米,固定在反應管(6)末端,中央有一個直徑為0.5-1毫米的圓孔,供牽拉索(9)在其中穿行,同時還是牽拉索(9)出入反應管(6)的支點;所述的反應管(6)是將柑橘病害生防工程菌株ML27細胞破裂,將細胞中特異質粒DNA常溫PCR,并使反應產物由于表面張力擴散而被吸到顯示玻片(4)通過染色顯示出來的部件,內部設置有牽拉活塞(5)和阻液片(14),兩側壁上開口有儲液管孔(17),上壁通過進液孔(13)和釋壓孔(15)與顯液腔(21)相通連,圓柱形,長度為5-10厘米,橫截面圓形,圓形直徑為0.5-3毫米,包括反應管腔(23)和反應管壁(25);反應管腔(23)是將柑橘病害生防工程菌株ML27細胞破裂和將菌株ML27細胞中特異質粒DNA常溫PCR的空間,圓柱形,長度為5-10厘米,橫截面圓形,圓形直徑為1-3毫米,與菌液腔(2)、儲液管腔(19)、和顯液腔(21)相連通,最外端被牽拉支板(10)封堵;反應管壁(25)是圍成反應管腔23的結構,反應管壁(25)上有儲液管口(11)、進液孔(13)和釋壓孔(15),在進液孔(13)和釋壓孔(15)之間還設置有前后兩個阻液片(14);所述的阻液片(14)圓片狀,直徑為0.5-3毫米,中間有一個直徑為0.5-1毫米的圓孔,供牽拉索(9)在其中穿行,周緣固定在反應管壁(25)上。2.根據權利要求1所述的室溫下快速識別柑橘病害生防工程菌株ML27的裝置,其特征在于:所述的柑橘病害生防工程菌株ML27特異質粒pML27是長度為2628bp的核酸序列,其堿基組成如Seq ID No:1所示;采用HAD反應擴增質粒pML27所用引物為引物1和引物2,引物1是長度為23bp的核酸序列,其堿基組成如Seq ID No:2所示;引物2是長度為22bp的核酸序列,其堿基組成如Seq ID No:3所示。
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專利技術附圖

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