本發明涉及一種誘導培養基及利用該誘導培養基游離培養番茄小孢子獲得愈傷組織的方法。上述誘導培養基包含有基本培養基(MS、PM或HN)、碳源(蔗糖或麥芽糖)、附加物(谷氨酰胺和/或AgNO)和植物生長調節劑(NAA+6-BA)。本發明綜合考慮了影響番茄小孢子培養的多方面因素，通過嘗試多種培養基及植物生長調節劑的組合，得到了適宜小孢子生長的培養基配方，高、低溫交替處理預培養的方法提高了出愈率，通過液體游離培養進一步提高了出愈率，為后續研究工作的順利開展奠定了堅實的基礎。

1.一種誘導培養基，包含有基本培養基、碳源、附加物和植物生長調節劑，其特征
在于：所述誘導培養基為(1)基本培養基為MS，植物生長調節劑為
NAA0.1mg.L^-1+6-BA0.2mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％
蔗糖；(2)基本培養基為MS，植物生長調節劑為NAA0.01mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1
谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％蔗糖；(3)基本培養基為MS，植物生長調節劑
為NAA0.01mg.L^-1+6-BA0.1mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源
為0.3％蔗糖；(4)基本培養基為MS，植物生長調節劑為NAA0.01mg.L^-1+6-BA0.2mg.L^-1，
附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％蔗糖；(5)基本培養基為
MS，植物生長調節劑為NAA0.1mg.L^-1+6-BA0.2mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺
+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％蔗糖；(6)基本培養基為HN，植物生長調節劑為
NAA0.01mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％蔗糖；(7)
基本培養基為HN，植物生長調節劑為NAA0.01mg.L^-1+6-BA0.01mg.L^-1，附加物為500
mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％蔗糖；(8)基本培養基為HN，植物生長
調節劑為NAA0.01mg.L^-1+6-BA0.1mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，
碳源為0.3％蔗糖；(9)基本培養基為HN，植物生長調節劑為6-BA0.01mg.L^-1，附加物
為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％蔗糖；(10)基本培養基為HN，植
物生長調節劑為NAA0.01mg.L^-1+6-BA0.2mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺
+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％蔗糖；(11)基本培養基為HN，植物生長調節劑為
NAA0.1mg.L^-1+6-BA0.2mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％
蔗糖；(12)基本培養基為MS，植物生長調節劑為NAA0.01mg.L^-1+6-BA0.1mg.L^-1，附
加物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％麥芽糖；(13)基本培養基為
MS，植物生長調節劑為6-BA0.01mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，
碳源為0.3％麥芽糖；(14)基本培養基為HN，植物生長調節劑為NAA0.01mg.L^-1，附加
物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％麥芽糖；(15)基本培養基為HN，
植物生長調節劑為NAA0.01mg.L^-1+6-BA0.1mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺
+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％麥芽糖；或者，(16)基本培養基為PM，植物生長調節劑
為6-BA0.01mg.L^-1，附加物為500mg.L^-1谷氨酰胺+3mg.L^-1AgNO₃，碳源為0.3％麥芽糖。
2.利用權利要求1所述的誘導培養基培養番茄小孢子獲得愈傷組織的方法，其特征
在于包括以下步驟：
(1)番茄單核靠邊期花蕾的消毒；
(2)番茄小孢子的游離；
(3)番茄小孢子的預處理；
(4)番茄小孢子的培養，于權利要求1所述的誘導培養基上培養，直到獲得
愈傷組織。
3.根據權利要求2所述的獲得愈傷組織的方法，其特征在于：步驟(1)中，獲得
所述番茄單核靠邊期花蕾的方法為：植株現蕾開始，從植株上采取花蕾，醋酸洋紅染色壓
片鏡檢，得到番茄單核靠邊期花蕾。
4.根據權利要求2所述的獲得愈傷組織的方法，其特征在于：步驟(1)中，所述
消毒的方法為先用流水沖洗番茄單核靠邊期花蕾10～20min，再用70％酒精消毒20～40s
和5％次氯酸鈉消毒15～20min，最后用無菌水沖洗。
5.根據權利要求2所述的獲得愈傷組織的方法，其特征在于：步驟(2)中，所述
游離的方法為番茄單核靠邊期花蕾放于無菌試管中，然后加入0.3mol/L甘露醇溶液
6～8mL，碾碎，所得懸浮液過300目的細胞篩，600～1200rpm離心2～5min，去掉上清液，
重復2～4次；最后，倒掉上清液，加入權利要求1所述的誘導培養基懸浮番茄小孢子，
并稀釋所得番茄小孢子到濃度為1.5～2×10⁵個/mL。
6.根據權利要求2所述的獲得愈傷組織的方法，其特征在于：步驟(3)中，所述
番茄小孢子的預處理是將步驟(2)所得番茄小孢子分裝在培養皿中，封口，然后在黑暗
中，于3～5℃下靜置1～3天后，再于30～40℃下靜置1～3天。
7.根據權利要求2～6任一項所述的獲得愈傷組織的方法，其特征在于：步驟(4)
中，所述番茄小孢子的培養是指于24～30℃下，在權利要求1所述的誘導培養基中進行暗
培養，直到有愈傷組織出現，再轉到24～30℃下光照14～18h進行光培養。
8.根據權利要求7所述的獲得愈傷組織的方法，其特征在于：所述暗培養的培養
溫度為27℃，有愈傷組織出現時，再轉到27℃下光照16h進行光培養。