1.一種鏈霉菌發酵生產奈馬菌素的培養基,其特征在于包括種子培養基和發酵培養
基,其中
所述種子培養基的組成為:豆油或玉米油5~10ml/L、麥芽糖10~15g/L、低溫黃豆餅粉
15~20g/L、花生餅粉10~15g/L、玉米漿5~9ml/L、玉米蛋白粉5~10g/L、硫酸銨0.5~1g/
L、輕質碳酸鈣1~5g/L;
所述發酵培養基的組成為:豆油或玉米油8~12ml/L、麥芽糖10~14g/L、低溫黃豆餅粉
25~30g/L、花生餅粉15~20g/L、玉米漿10~15ml/L、玉米蛋白粉10~15g/L、硫酸銨0.5~
1g/L、輕質碳酸鈣1~5g/L、磷酸二氫鉀0.5~0.9g/L、氯化鈉0.3~0.7g/L、硫酸鎂0.03~
0.06g/L、硫酸亞鐵0.1~0.5g/L、聚氧丙烯甘油0.3~0.4g/L、麥芽糖酶0.002~0.004g/L。
2.一種利用權利要求1所述培養基生產奈馬菌素的培養方法,其特征在于其工藝步驟
為:
1) 種子培養:首先將種子培養基滅菌并冷卻至25~30℃,并用無菌空氣保壓,然后在
火焰保護下,將已經培養好的鏈霉菌母瓶發酵液按照0.2~0.3L/m3的接種量接入種子培養
基中進行種子培養,至菌體濃度20~30%、pH值7~8、培養時間40~50h時移種,移種比例控
制在0.8~1m3/m3;
2) 發酵培養:先將發酵培養基滅菌,冷卻至20~27℃,并用無菌空氣保壓,然后將培養
好的種子液移入發酵培養基進行發酵培養,至菌體濃度35~40%、總糖<5mg/100ml、脂肪<
0.8g/L、氨基氮10~20mg/100ml、化學效價>3800u/mL、pH5~6、培養時間230~240h時終止
發酵。
3.按照權利要求2所述的培養方法,其特征在于所述滅菌后的種子培養基的質量要求:
氨基氮40~60mg/100ml、溶磷50~100ug/ml、總糖15~25mg/100ml、pH7~8;
滅菌后的發酵培養基的質量要求:氨基氮60~80mg/100ml、溶磷100~150ug/ml、總糖
30~40 mg/100ml、pH6~7。
4.按照權利要求2所述的培養方法,其特征在于所述培養好的鏈霉菌母瓶發酵液質量
要求為:pH6~8;菌體濃度10~30%;鏡檢無雜菌;發酵單位800~1500u/ml。
5.按照權利要求2所述的培養方法,其特征在于所述種子培養條件為:罐壓0.03~
0.05MPa;罐溫28~33℃;空氣流量:0~5h,采用空氣攪拌代替機械攪拌;6h~移種:30~
50m3/h;攪拌轉速60~80r/min。
6.按照權利要求2所述的培養方法,其特征在于所述發酵培養條件為:
a 培養基初始pH:發酵培養基滅菌后pH控制在6~7;
b 溫度:采用變溫控制工藝,
0~60h:培養溫度29~30℃,
61~200h:培養溫度31~32℃,
201h~發酵結束:培養溫度30~31℃;
c 攪拌轉速:采用變頻攪拌控制工藝,
0~60h:轉速控制在100r/min,
61~200h:轉速控制在120r/min,
201h~發酵結束:轉速控制在90r/min;
d 壓力控制:罐壓0.05~0.06MPa;
e pH控制:發酵過程中pH控制在5~7;
f 空氣流量:0~60h:100~150m3/h;61~200h:200~300m3/h;201h~發酵結束:150~
200m3/h;
h 溶氧控制:
發酵前60h內,不控制溶氧;
60~100h,溶氧控制在60%以上;
101~200h,溶氧控制在30%以上;
201~發酵結束:溶氧控制在40%以上。
7.按照權利要求2所述的培養方法,其特征在于在發酵過程中采用流加法進行補料,補
料包括補油、補水、補硫酸銨、補糖和pH控制,其中
a 補油工藝控制:
發酵前60h不用進行補油,
發酵時間在61~200h,當脂肪含量低于1g/L,補入豆油或玉米油,控制脂肪含量為1~
1.5g/L,每隔6~8h檢測發酵液脂肪含量,
發酵時間在201h~發酵結束,當脂肪含量低于3%,補入豆油或玉米油,控制脂肪含量為
0.5~0.8g/L,每隔6~8h檢測發酵液脂肪含量;
b補水工藝控制:
發酵前60h不用進行補水,
發酵時間在61~200h,當菌體濃度高于50%,加入滅菌水,要求控制發酵液菌體濃度在
40~45%,每隔6~8h檢測發酵液菌體濃度,
發酵時間在201h~發酵結束,當菌體濃度高于40%,加入滅菌水,要求控制發酵液菌體
濃度在35~40%,每隔6~8h檢測發酵液菌體濃度;
c 發酵過程pH控制工藝:
發酵前60h,pH不進行控制,
發酵時間在61~200h,若pH<6.0,加入10~20%的氫氧化鈉,調節pH至6~7;若pH>7,
加入30%的硫酸銨溶液,調節pH至6~7;
發酵時間在201~發酵結束,若pH<6.5,加入10~20%的氫氧化鈉,調節pH控至5~6;若
pH>6,加入30%的硫酸銨溶液,調節pH至5~6;
d 補入麥芽糖:
發酵前60h,總糖含量不進行控制,
發酵61h至200h:總糖含量<10mg/100ml時,補入已滅菌的麥芽糖溶液,使總糖的含量
控制在10~15mg/100ml;
發酵201h至發酵結束:總糖含量<3mg/100ml時,補入已滅菌的麥芽糖溶液,使總糖的
含量控制在3~5mg/100ml;
上述補糖工藝中加入麥芽糖酶,其濃度控制在0.001~0.003%;
e 補硫酸銨
奈馬菌素發酵培養過程中,分別在60h、150h和220h補入30%的硫酸銨溶液,其用量控制
在發酵液體積的0.1~0.3%。
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