本發(fā)明公開了一種通過離體挽救培養(yǎng)獲得草莓遠(yuǎn)緣雜種的方法及培養(yǎng)基，該技術(shù)分別以栽培草莓品種久香、甜查理、豐香為母本或父本，野生黃毛草莓為父本或母本進(jìn)行雜交，正交與反交同時進(jìn)行。通過對雜交授粉后的未成熟胚進(jìn)行離體培養(yǎng)，在胚敗育前將其取出進(jìn)行挽救培養(yǎng)，避免遠(yuǎn)緣雜種胚的衰亡，使大量遠(yuǎn)緣雜種胚繼續(xù)發(fā)育成幼苗，并進(jìn)入選育程序，縮短了育種周期；同時，獲得了大量遠(yuǎn)緣雜交后代，實(shí)現(xiàn)了草莓屬種間的遠(yuǎn)緣雜交，創(chuàng)制了一批新種質(zhì)，有效地縮短了草莓雜交后代的培育周期，雜種胚成苗率可達(dá)到91.67％。

1.通過離體挽救培養(yǎng)獲得草莓遠(yuǎn)緣雜種的方法，包括以下步驟：
1)雜交授粉：以栽培草莓品種和野生草莓品種為雜交親本進(jìn)行雜交授粉；
2)果實(shí)消毒：將授粉后5～35天其種子未完全發(fā)育的果實(shí)取下，于4℃～7℃存放3～4小
時，取大小為1～3厘米的果實(shí)，先用70％的酒精表面消毒10～30秒，再用0.1wt％的升汞溶
液滅菌1～3分鐘，之后用無菌水清洗3～5遍，吸干果實(shí)表面水分；
3)未成熟胚剝離：在無菌條件下，將滅菌的果實(shí)取下種子剝離其幼胚，立即接種于誘導(dǎo)
培養(yǎng)基中離體培養(yǎng)，先暗培養(yǎng)7天，再進(jìn)行光照培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)21～28天后獲得膨大的胚；
光照培養(yǎng)條件為：光照時間10小時/天，光照強(qiáng)度2000～3000Lx，培養(yǎng)溫度24±1℃；
誘導(dǎo)培養(yǎng)基：1/2MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30～50g/L，瓊脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.3～
0.5mg/L，pH5.5～5.8；
4)胚萌發(fā)培養(yǎng)：將膨大的胚剝除胚乳后置于胚萌發(fā)培養(yǎng)基中進(jìn)行挽救培養(yǎng)，培養(yǎng)30～
35天后幼胚萌發(fā)，光照培養(yǎng)條件同步驟3)；
胚萌發(fā)培養(yǎng)基：1/2MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30～50g/L，瓊脂6～8g/L，萘乙酸NAA0.2～
0.5mg/L，6-芐氨基腺嘌呤6-BA1.2～1.5mg/L，pH5.5～5.8；
5)增殖培養(yǎng)：將萌發(fā)的幼胚接種至增殖培養(yǎng)基中，光照培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基組成與步驟
4)相同，每10～15天繼代增殖1次，獲得芽苗；
6)生根培養(yǎng)：將經(jīng)過1～4次繼代增殖培養(yǎng)的芽苗從芽叢中切下，轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基中促
使其生根，生根培養(yǎng)45～60天，得到生根的草莓胚苗，培養(yǎng)溫度24±1℃；
生根培養(yǎng)基：1/2MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30～50g/L，瓊脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.2～
0.5mg/L，6-芐氨基腺嘌呤6-BA0.02～0.05mg/L，水解酪蛋白LH0.2～0.4g/L，腺嘌呤Ad4～
6mg/L，pH5.5～5.8；
7)煉苗移栽：開瓶后在瓶底加水，煉苗3～4天，然后將生根苗從培養(yǎng)瓶中取出，清水洗
凈根系附帶的培養(yǎng)基，然后移栽在栽培基質(zhì)中遮光處理2～3天，在溫室中保持相對濕度
75％～85％進(jìn)行煉苗，培養(yǎng)20～30天即可移入大田種植。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過離體挽救培養(yǎng)獲得草莓遠(yuǎn)緣雜種的方法，其特征在于，步
驟7)所述的煉苗移栽過程為：將生根后的草莓胚苗，移栽前將瓶蓋打開一條縫，注入10～15
毫升無菌水進(jìn)行自然馴化2～3天，接著完全揭開瓶蓋并添加10～15毫升蒸餾水鍛煉1天，將
生根苗從培養(yǎng)瓶中取出，清水洗凈根系附帶的培養(yǎng)基，然后移栽在滅菌的栽培基質(zhì)中遮光
遮蔭處理2～3天，在溫室中保持相對濕度75％～85％進(jìn)行煉苗，培養(yǎng)20～30天即可移入大
田種植。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的通過離體挽救培養(yǎng)獲得草莓遠(yuǎn)緣雜種的方法，其特征在
于，所述的栽培草莓品種為久香、甜查理或豐香，野生草莓品種為野生黃毛草莓。
4.用于離體挽救培養(yǎng)獲得草莓遠(yuǎn)緣雜種的培養(yǎng)基，其包括，誘導(dǎo)培養(yǎng)基、胚萌發(fā)培養(yǎng)基
和生根培養(yǎng)基，其特征在于，
所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其由以下組分組成：1/2MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30～50g/L，瓊脂6～
8g/L，吲哚丁酸IBA0.3～0.5mg/L；
所述的胚萌發(fā)培養(yǎng)基，其由以下組分組成：1/2MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g～50g/L，瓊脂6g
～8g/L，萘乙酸NAA0.2～0.5mg/L，6-芐氨基腺嘌呤6-BA1.2～1.5mg/L；
所述的生根培養(yǎng)基，其由以下組分組成：1/2MS基本培養(yǎng)基，蔗糖30g～50g/L，瓊脂6g～
8g/L，吲哚丁酸IBA0.2～0.5mg/L，6-芐氨基腺嘌呤6-BA0.02～0.05mg/L，水解酪蛋白LH0.2
～0.4g/L，腺嘌呤Ad4～6mg/L。