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一種快速從土壤篩選產抗菌素的放線菌的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-15
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310202954.6 
  • 技術(專利)名稱 一種快速從土壤篩選產抗菌素的放線菌的方法 
  • 項目單位 三峽大學
  • 發明人 陳國華,付桂榮,郭倩倩 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 楊培釗
  • 發布時間 2021-12-15  
  • 01

    項目簡介

    一種快速從土壤中篩選產抗菌素的放線菌的方法,包括以下步驟:采集土壤樣本;培養:樣本系列經梯度稀釋后,接種于含有高氏一號培養基的培養皿里,培養6-12天;挑選單菌落:將形成的單菌落數量最多培養皿中所有的單菌落挑選出來進行轉接;長方形轉接:所有單菌落編號,轉接至新的高氏一號培養基上,劃短線轉接到新培養基中;篩選:用不銹鋼打孔器將生長放線菌的培養基打成圓形的瓊脂快,用鑷子夾取瓊脂塊放置于預先涂布測試細菌的培養基上,培養18-24h,采用透明圈直徑D-瓊脂塊直徑d分析抗菌活性大小,將放線菌繼續分離培養,得到穩定性的抗菌素放線菌。本發明提供的從土壤中篩選產抗菌素放線菌的方法,具有操作方便、迅速的優勢,可替代單菌落瓊脂塊法、單菌落涂布瓊脂塊和單菌落液體發酵法而廣泛推廣使用。
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  • 02

    說明書

    1.一種快速從土壤中篩選產抗菌素的放線菌的方法,其特征在于該方法包括以下步驟:1)土壤樣本的采集及處理:采集新鮮土壤,放入50mL滅菌塑料袋中,立即帶回實驗室,稱取濕重樣品5g于80℃烘干恒重,計算出5g干重土樣所需濕重量;2)培養:將步驟1)采集的相當于干重5g的濕重樣本經梯度稀釋液稀釋后在65℃水浴恒溫10min,接種于含有高氏一號培養基的培養皿里,培養7-12天,所述的梯度稀釋培養液的培養方法為,將相當于干重5g的濕重樣本加入滅菌水中,充分混勻,得到10-1的稀釋液;取5mL10-1的稀釋液加入滅菌水中,充分混勻,得到10-2的稀釋液;取5mL10-2的稀釋液加入滅菌水中,充分混勻,得到10-3的稀釋液;3)挑選單菌落:將步驟2)中形成的單菌落數量最多的培養皿中所有的單菌落挑選出來進行轉接;4)長方形轉接:將步驟3)所有單菌落編號,用接種環轉接至新的高氏一號培養基上,劃短線轉接到新培養基中,在28℃培養7-12天,其中每個短線之間距離不少于7mm,每個10cm的培養皿至少轉接35個單菌落;5)篩選:用直徑為4mm的不銹鋼打孔器將生長有放線菌的瓊脂培養基打成2塊圓形的瓊脂培養基塊,用鑷子分別夾取瓊脂塊放置于預先涂布測試的帶細菌的培養基上,37℃培養18-24?h,觀察抗菌活性,產生透明圈的即為有抗菌活性,其中抗菌活性大小R?=?透明圈直徑D?-?瓊脂塊直徑d;6)將產生透明圈瓊脂塊的原始單菌落重復步驟4)、5)的轉接、篩選至少10次,進行分離純化,得到產抗菌素的放線菌。2.根據權利要求1所述的一種快速從土壤中篩選產抗菌素的放線菌的方法,其特征在于:長方形轉接中,劃短線的長邊長為8-10mm,寬為一個接種環劃線寬度。3.根據權利要求1所述的一種快速從土壤中篩選產抗菌素的放線菌的方法,其特征在于:一個原始單菌落通過長方形轉接后直接測試兩類不同的細菌:革蘭氏陰性細菌和革蘭氏陽性細菌。
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專利技術附圖

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