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一種無胎牛血清擴增激活LAK細胞的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-28
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201610145951.7 
  • 技術(專利)名稱 一種無胎牛血清擴增激活LAK細胞的方法 
  • 項目單位 浙江大學
  • 發明人 徐以兵,鄭樹,梁廷波,朱莉莉,胡薇蕾 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 秦愛群
  • 發布時間 2021-10-28  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種無胎牛血清擴增激活LAK細胞的方法。本發明的優點是與現有的胎牛培養基相比,本發明能夠避免因采用胎牛血清帶來的風險;與現有的無血清培養基相比,擴增和激活的免疫細胞的純度更高、擴增效率更高、殺傷腫瘤的能力更強。本發明擴增和激活的免疫細胞的純度、擴增效率、殺傷腫瘤的能力與現有的胎牛血清培養基相當。本發明擴增的免疫細胞在控制和緩解部分疾病的進展,如癌癥、傳染性疾病、糖尿病、或器官移植和乙肝方面具有廣闊的前景。
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  • 02

    說明書

    1.一種無胎牛血清擴增激活LAK淋巴細胞的方法,其特征在于,使用轉染了CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L的K562細胞,聯合一種或多種蛋白質共同對淋巴細胞進行擴增激活,得到LAK淋巴細胞;所述LAK淋巴細胞為CIK淋巴細胞,擴增激活的具體步驟為:(1)對轉染了CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L的K562細胞進行輻照致死處理;(2)在含有淋巴細胞的培養液中,加入步驟(1)處理后的K562細胞、以及白介素2、IL-1α、IFN-γ、CD3 mAb共同培養7天;所述CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L量均為50pM-1000pM;白介素2、IL-1α、IFN-γ的量均為10-1000IU/毫升,CD3 mAb的量為10-1000納克/毫升;(3)將培養后的培養液離心,獲取淋巴細胞沉淀,并用培養液重懸;(4)加入輻照處理后的K562細胞培養7天;將培養后的培養液離心,獲取存活的淋巴細胞沉淀,即得到CIK淋巴細胞;其中,所述培養液由100體積的GT-T551和1體積的人血清組成;所述淋巴細胞選自外周血淋巴細胞、臍帶血淋巴細胞、CIK細胞中的一種或多種,或者為外周血淋巴細胞、臍帶血淋巴細胞、CIK細胞中的一種或多種和其它淋巴細胞的組合,或為白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L、白介素2、 IL-1α、 IFN-γ、CD3 mAb中的一種或多種按照任意比組成的混合物作用于人體血管中的血液所產生的CIK淋巴細胞;所述LAK淋巴細胞為NK細胞,擴增激活的具體步驟為:(a)對轉染了CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L的K562細胞進行輻照致死處理;(b)在含有淋巴細胞的培養液中,加入步驟(a)處理后的K562細胞、以及白介素2共同培養7天;所述的CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L的量均為50pM-1000pM;白介素2的量為10-1000IU/毫升;(c)將培養后的培養液離心,獲取存活的淋巴細胞沉淀,并用培養液重懸;(d)加入輻照處理后的K562細胞培養7天;培養后的培養液離心,獲取存活的淋巴細胞沉淀,即得到NK淋巴細胞;所述淋巴細胞選自外周血淋巴細胞、臍帶血淋巴細胞、NK細胞中的一種或多種,或者為外周血淋巴細胞、臍帶血淋巴細胞、NK細胞中的一種或多種和其它淋巴細胞的組合,或為白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L、白介素2中的一種或多種按照任意比組成的混合物作用于人體血管中的血液所產生的NK淋巴細胞。2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L由K562細胞在細胞膜表面即時表達,白介素2、IL-1α、IFN-γ、CD3 mAb均為純化的蛋白質;所述純化是指質量分數在90%以上。3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述CD8α-白介素21中,CD8α為在K562細胞膜上表達的膜蛋白,CD8α連接白介素21后使得白介素21表達在細胞膜上,成為跨膜蛋白;CD14、CD19、CD86 和CD137L 均為膜蛋白。4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,轉染了CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L的K562細胞是蛋白穩定表達系統。5.根據權利要求1-4任一項所述的方法,其特征在于,所述K562細胞與淋巴細胞的數量比為K562細胞:淋巴細胞=1-10:1。6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述K562細胞與淋巴細胞的數量比為K562細胞:淋巴細胞=1-4:1。7.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述K562細胞與淋巴細胞的數量比為K562細胞:淋巴細胞=1:1。8.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述輻照的劑量為100Gy-1000Gy。
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