本發(fā)明公開了一種高效的hPSCs向MSCs分化誘導(dǎo)的方法，其步驟是：1)將未分化hPSCs細(xì)胞株轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外基質(zhì)包被的培養(yǎng)板上培養(yǎng)后；換用含有BMP?SMAD1/5/8信號(hào)通路激活劑、TGF?β1/Activin/Nodal?SMAD2/3信號(hào)通路激活劑、Wnt激活劑、PI3K抑制劑的分化培養(yǎng)基培養(yǎng)；2)去除舊培養(yǎng)基，換含有TGF?β1/Activin/Nodal?SMAD2/3信號(hào)通路抑制劑分化培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；3)將細(xì)胞消化并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)板上，換含有TGF?β1/Activin/Nodal?SMAD2/3信號(hào)通路抑制劑分化培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；4)將細(xì)胞消化并轉(zhuǎn)移到貼壁用培養(yǎng)板上繼續(xù)培養(yǎng)，獲得MSCs。本發(fā)明在體外建立了完整的hPSC通過(guò)中段原條階段或側(cè)中胚層階段定向分化為MSCs的方案方法。相較于常規(guī)方法，本技術(shù)步驟精簡(jiǎn)，操作簡(jiǎn)易，再現(xiàn)性高，僅僅用12天便可以獲得表型成熟、高質(zhì)量的MSCs。

1.一種高效的hPSCs向MSCs分化誘導(dǎo)的方法，其步驟是：
1）將未分化hPSCs細(xì)胞株轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外基質(zhì)包被的培養(yǎng)板上培養(yǎng)后；換用含有BMP-
SMAD1/5/8信號(hào)通路激活劑、TGF-β1/ Activin/ Nodal-SMAD2/3信號(hào)通路激活劑、Wnt激活
劑和PI3K抑制劑的分化培養(yǎng)基培養(yǎng)；獲得中段原條；
2）去除舊培養(yǎng)基，換含有TGF-β1/ Activin/ Nodal-SMAD2/3信號(hào)通路抑制劑分化培養(yǎng)
基繼續(xù)培養(yǎng)；
3）將細(xì)胞消化并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)板上，換含有TGF-β1/ Activin/ Nodal-SMAD2/3信號(hào)
通路抑制劑分化培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；
4）將細(xì)胞消化并轉(zhuǎn)移到貼壁用培養(yǎng)板上繼續(xù)培養(yǎng)，獲得MSCs；
上述獲得的MSCs是使用誘導(dǎo)hPSCs通過(guò)中段原條階段向MSCs定向分化的方法來(lái)獲得
的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3）中，新的培養(yǎng)板是用明膠類細(xì)胞外
基質(zhì)包被的，進(jìn)行細(xì)胞篩選。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，明膠類細(xì)胞外基質(zhì)為細(xì)胞培養(yǎng)用明膠或I
型、III型、IV型、V型膠原蛋白和彈性蛋白以及層粘連蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）中，用含有BMP-SMAD1/5/8信號(hào)通路
激活劑、TGF-β1/ Activin/ Nodal-SMAD2/3 信號(hào)通路激活劑、Wnt激活劑和PI3K抑制劑的
分化培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)間為12~72h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）中，BMP-SMAD1/5/8信號(hào)通路激活劑
BMP2、BMP4、BMP7中的至少一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）中，TGF-β1/Activin/ Nodal-
SMAD2/3 信號(hào)通路激活劑為Activin A、Activin B、TGF-β1、Nodal中的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）中， Wnt激活劑為CHIR99021，BIO、
WNT-3a、R-spondin-2中的至少一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）中， PI3K抑制劑為TG100713、
PIK90、PI-103中的至少一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，TGF-β1/Activin/Nodal-SMAD2/3信號(hào)通路
抑制劑為SB431542、SB505124、A8301、RepSox中的至少一種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3）中，繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間為2～30天。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2）繼續(xù)培養(yǎng)之前，先用含有BMP-
SMAD1/5/8信號(hào)通路激活劑、TGF-β1/ Activin/ Nodal-SMAD2/3信號(hào)通路激活劑和Wnt抑制
劑的分化培養(yǎng)基培養(yǎng)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2）中，繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間為2~10天。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，Wnt抑制劑為Wnt-C59、XAV-939中的至少
一種。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4）中繼續(xù)培養(yǎng)的方法是：用含有間充
質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟1)至步驟4）中，至少一種培養(yǎng)基中
含有堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子bFGF。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，獲得的MSCs是使用誘導(dǎo)hPSCs通過(guò)側(cè)中胚
層階段向MSCs定向分化的方法來(lái)獲得的。
17.一種MSCs細(xì)胞，由權(quán)利要求1～16任意一項(xiàng)所述的方法制備而成。