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一種以花瓣為外植體建立藍(lán)晶花小鱗莖再生體系的方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-15
  • 技術(shù)成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201610663796.8 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種以花瓣為外植體建立藍(lán)晶花小鱗莖再生體系的方法 
  • 項(xiàng)目單位 浙江大學(xué)
  • 發(fā)明人 任梓銘,夏宜平,張棟,李岳,孫敏譯,吳昀 
  • 行業(yè)類別 中藥材獲取-植物藥材種植
  • 技術(shù)成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 馮懷榮
  • 發(fā)布時間 2021-12-15  
  • 01

    項(xiàng)目簡介

    本發(fā)明公開了一種以花瓣為外植體建立藍(lán)晶花小鱗莖再生體系的方法,該方法包括:取藍(lán)晶花花蕾,消毒處理后,切取花瓣,接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,培養(yǎng)獲得含小鱗莖的愈傷組織;將小鱗莖從愈傷組織中剝離下來,并轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中,培養(yǎng)獲得小鱗莖增殖體;取所述小鱗莖增殖體,接入生根培養(yǎng)基中,進(jìn)行小鱗莖的膨大和生根誘導(dǎo),獲得藍(lán)晶花小鱗莖。本發(fā)明以花瓣為外植體,通過消毒處理、誘導(dǎo)愈傷、小鱗莖再生和增殖以及小鱗莖膨大和生根培養(yǎng),獲得藍(lán)晶花小鱗莖再生體系;顯著降低了污染率,提高了誘導(dǎo)率和增殖效率,縮短了擴(kuò)繁周期。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種以花瓣為外植體建立藍(lán)晶花小鱗莖再生體系的方法,其特征在于,包括以下步
    驟:
    (1)外植體取材及處理
    于藍(lán)晶花花期6月,采長1.5~2.5cm花苞未打開的幼嫩花蕾,置于封口袋中在4℃冰箱
    中冷藏1周;
    將冷藏后的花蕾材料轉(zhuǎn)移至燒杯中,在滴加了少許吐溫及洗潔精的水中浸泡20min,隨
    后將紗布覆蓋于燒杯口,隔紗布用流水沖洗1.5h;將沖洗后的外植體置于75%的乙醇中浸
    泡30s,再置于0.1%升汞中浸泡處理10min,浸泡過程中不斷搖晃使外植體與消毒試劑充分
    接觸;再用無菌水漂洗5遍,每遍不少于3分鐘,直至無明顯泡沫出現(xiàn);用鑷子取出外植體,置
    于無菌操作臺上,用濾紙吸干表面水分,待接種;
    (2)外植體接種及愈傷組織誘導(dǎo)
    于超凈工作臺上,用滅菌鑷子和解剖刀將步驟(1)消毒處理后的幼嫩花蕾剝離開,切取
    花瓣,將其平鋪接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,花瓣基部傷口處輕插入培養(yǎng)基中;在培養(yǎng)溫度為
    25±2℃的全黑暗誘導(dǎo)條件下60d開始出現(xiàn)愈傷組織;所述愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基
    本培養(yǎng)基,即每升培養(yǎng)基添加4.43gMS粉,所述培養(yǎng)基中還含有30g/L的蔗糖,8g/L瓊脂,
    0.5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤,2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸,pH值為5.8;
    (3)小鱗莖再生
    將花瓣外植體連同愈傷組織團(tuán)塊一起于超凈工作臺上轉(zhuǎn)接到新鮮的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基,
    進(jìn)行90d的小鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng),每30d繼代一次,至小鱗莖直徑達(dá)0.4~0.5cm;培養(yǎng)環(huán)境的光照
    強(qiáng)度為12.5μmol·m-2·s-1,光照時間14h·d-1,溫度為25±2℃;
    (4)小鱗莖增殖
    將分化形成的小鱗莖從愈傷組織團(tuán)塊上分離下來,轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基,每4周繼代一次,
    以維持小鱗莖持續(xù)增殖;在光照強(qiáng)度為12.5μmol·m-2·s-1、光照時間14h·d-1,溫度為25±
    2℃的條件下進(jìn)行90d的小鱗莖增殖培養(yǎng),獲得小鱗莖增殖比率為1:25;
    所述增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,即每升繼代培養(yǎng)基中添加4.43gMS粉,增殖
    培養(yǎng)基中還含有30g/L的蔗糖、8g/L瓊脂、2.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、0.5mg/Lα-萘乙酸,增
    殖培養(yǎng)基的pH值為5.9;
    (5)小鱗莖膨大及生根培養(yǎng):
    用滅菌的鑷子和解剖刀將經(jīng)由增殖培養(yǎng)得到的小鱗莖叢剝落分離成單獨(dú)的小鱗莖個
    體,基盤向下輕插入培養(yǎng)基中,進(jìn)行小鱗莖的膨大及生根誘導(dǎo);在光照強(qiáng)度為12.5μmol·m
    -2·s-1、光照時間14h·d-1,溫度為25±2℃的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)90d,可獲得藍(lán)晶花小鱗莖;
    所述膨大及生根培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,即每升培養(yǎng)基中添加有4.43g MS
    粉,膨大培養(yǎng)基中還含有濃度為2.0mg/L的α-萘乙酸、90g/L的蔗糖、8g/L的瓊脂;pH值為
    5.9。
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專利技術(shù)附圖

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