本發明公開了一種制備單寧酶的方法，無花果曲霉斜面菌種經搖瓶擴大培養，以玉米粉、豆粕混合物或蔗渣、麩皮混合物為發酵培養基底物，加入鹽溶液配置成發酵培養基。接入無花果曲霉懸液，35℃恒溫發酵65h，加入pH5.5的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，震蕩提取90min,經濾紙過濾，收集粗酶液，純化，冷凍干燥制得單寧酶凍干粉。

1.一種制備單寧酶的方法，包括以下步驟：?(1)種子擴大培養：將無花果曲霉斜面菌種接入搖瓶擴大培養；?(2)配置發酵培養基：以玉米粉、豆粕混合物或蔗渣、麩皮混合物作發酵培養基底物，加入鹽溶液，滅菌、冷卻，所述的玉米粉、豆粕混合物由玉米粉、豆粕以2︰1的質量比均勻混合而成，蔗渣、麩皮混合物是由蔗渣、麩皮以1︰1質量比均勻混合制成，培養基底物和加入的鹽溶液成6︰7質量體積比比例，每升鹽溶液含有10gNH₄Cl、1gKCl、2gK₂HPO₄、1gMgSO₄·7H₂O；?(3)單寧酶發酵：培養基冷卻后，接入1mL無花果曲霉菌Gim3.6懸液，濃度為1×10⁸個孢子/mL，35℃恒溫發酵65h；?(4)粗酶液制備：往恒溫發酵結束后的發酵培養基加入pH5.5的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，置于搖床震蕩提取90min，過濾，收集粗酶液；?(5)單寧酶純化。?2.根據權利1所述的一種制備單寧酶的方法，其特征在于：步驟(4)中所述的發酵培養基與pH5.5檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液成1︰10質量體積比，搖床搖速為160r/min。?3.根據權利1所述的制備單寧酶的方法，其特征在于：所述單寧酶純化可采用硫酸銨分級沉淀法、丙酮沉淀法、反膠團萃取法三個方法中的任一種純化方法。?4.根據權利3所述的制備單寧酶的方法，其特征在于：所述硫酸銨分級沉淀法具體操作為，往粗酶液中加入飽和度為30％～70％硫酸銨，收集沉淀，加入與步驟(4)中pH5.5檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液成1︰1體積比的5℃的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液溶解沉淀，以葡聚糖凝膠Sephacryl200-HR為層析柱層析，得單寧酶純化液，冷凍干燥制得單寧酶凍干粉。?5.根據權利3所述的制備單寧酶的方法，其特征在于：所述丙酮沉淀法具體操作為，往粗酶液中加入-20℃丙酮，4℃靜置3h，6000r/min離心分離20min，收集沉淀，加入與步驟(4)中pH5.5檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液成1︰1體積比的5℃的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液溶解沉淀，以葡聚糖凝膠Sephacryl200-HR為層析柱層析，得單寧酶純化液，冷凍干燥制得單寧酶凍干粉。?6.根據權利3所述的制備單寧酶的方法，其特征在于：所述反膠團萃取法?具體操作為，將收集到的粗酶液作為水相，以1︰1體積比加入有機相75mmol/L?CTAB-異辛烷反膠團溶液，在200r/min搖床上震蕩混合13min，4000r/min離心分離5min，取有機相，按1:1體積比加入反萃取水相0.5mol/L?NaCl溶液，在200r/min搖床上震蕩混合30min，4000r/min離心分離5min，獲取水相，用聚乙二醇6000包埋濃縮，以葡聚糖凝膠Sephacryl200-HR為層析柱層析，得單寧酶純化液，冷凍干燥制得單寧酶凍干粉。?