1.一種人參高效組織培養和再生的方法,其特征是具體步驟如下:1)?愈傷組織的誘導及繼代:取人參的莖節,在超凈臺中用鋒利刀片切成3-5毫米大小的組織塊,放入三角瓶中,用70%酒精浸泡、0.1%升汞滅菌,然后用無菌蒸餾水徹底漂洗5-6遍,將組織塊轉移到盛有愈傷組織誘導培養基的三角瓶中,置于25℃培養箱中暗培養,每3周進行一次繼代培養,在超凈臺中生長旺盛的愈傷組織從原瓶中轉移到有新鮮繼代培養基的三角瓶中,然后繼續25℃暗培養,所用的愈傷組織誘導培養基為:MS基本培養基+CH?5-500mg/L?+?2,4-D?0.1-20mg/L?+?6-BA?0.1-5mg/L+?NAA?0.1-5mg/L,?所用的繼代培養基為:MS基本培養基??+?CH?5-500mg/L?+?2,4-D?0.1-10mg/L?+?6-BA?0.1-5mg/L?+?NAA?0.1-5mg/L?+?KT?0.1-1mg/L;2)?植株再生:在愈傷組織繼代培養2次之后,取愈傷組織進行分化,在超凈臺中將愈傷組織塊從繼代培養基上取出,轉移到含有分化培養基即芽再生培養基的三角瓶中,在培養箱中25℃光培養,即光周期16小時光照+8小時黑暗,光照強度為3000Lux,10天以后,可見愈傷組織部分突起處出現綠色芽點,2-3周后變成幼芽,將幼芽在無菌條件下轉移到含有生根培養基的三角瓶中,繼續光培養,?7天后可見幼苗的基部與培養基交接處出現根組織,再過約30天的生根培養,即可長成根長度1厘米以上的完整再生植株,分化培養基為:1/4MS基本培養基?+?CH?5-500mg/L??+?NAA?0.5-10mg/L?+?6-BA?0.1-5mg/L?+?KT?0.1-1mg/L;?????所述MS基本培養基成分為:
大量元素使用濃度 (mg/L)
硝酸鉀 KNO31900
硝酸銨 NH4NO31650
磷酸二氫鉀 KH2PO4170
硫酸鎂 MgSO4·7H2O370
氯化鈣 CaCl2·2H2O440
微量元素?
碘化鉀 KI0.83
硼酸 H3BO36.2
硫酸錳 MnSO4·4H2O22.3
硫酸鋅 ZnSO4·7H2O8.6
鉬酸鈉 Na2MoO4·2H2O0.25
硫酸銅 CuSO4·5H2O0.025
氯化鈷 CoCl2·6H2O0.025
鐵鹽?
乙二胺四乙酸二鈉 Na2·EDTA37.25
硫酸亞鐵 FeSO4·7H2O27.85
有機成分?
肌醇100
甘氨酸2
鹽酸硫胺素 VB10.1
鹽酸吡哆醇 VB60.5
煙酸 VB5 或 VPP0.5
蔗糖 sucrose30g/L
瓊脂 agar8g/L
?3)?煉苗及移栽:打開三角瓶的封口膜,將三角瓶連同里面的幼苗在培養箱中放置3天,然后將它們放入即將栽種幼苗的溫室中3天煉苗,將幼苗完整地從培養基中取出,小心地除去附著在上面的愈傷組織和培養基碎塊,并用蒸餾水反復沖洗干凈,然后將幼苗栽入滅菌營養土中,保持環境濕度和潔凈度,2-3周后幼苗即可成活。