本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種液固雙相發(fā)酵生產(chǎn)小克銀漢霉孢子的方法。具體為將活化后的小克銀漢霉的種子按質(zhì)量百分比為10～30％接入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25～30℃下振動(dòng)發(fā)酵2～3天，在將液體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)好的小克銀漢霉菌絲體分離，小克銀漢霉菌絲體洗滌2～4次，而后將其粉碎，粉碎后的菌絲體與固體發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比為1∶6～10混合，在30～35℃、濕度60～80％條件下進(jìn)行固相發(fā)酵3～5天以產(chǎn)生孢子。采用本發(fā)明方法可以大量生產(chǎn)小克銀漢霉孢子，產(chǎn)量達(dá)到2～6×10個(gè)/100克培養(yǎng)料，且孢子易與菌絲體和培養(yǎng)料分離，生產(chǎn)出的孢子可以直接用于發(fā)酵生產(chǎn)和研究。

1.一種液固雙相發(fā)酵生產(chǎn)小克銀漢霉孢子的方法，其特征在于：將活化后的小克銀漢霉的種子按質(zhì)量百分比為10～30％接入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中在25～30℃下振動(dòng)發(fā)酵2～3天，再將液體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)好的小克銀漢霉菌絲體分離，小克銀漢霉菌絲體洗滌2～4次，而后將其粉碎，粉碎后的菌絲體與固體發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比為1∶6～10混合，在30～35℃、濕度60～80％條件下進(jìn)行固相發(fā)酵3～5天以產(chǎn)生孢子；?所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為馬鈴薯150～200克，葡萄糖或蔗糖15～20克，磷酸二氫鉀1～2克，硫酸鎂0.5～1克，酵母膏0～0.5g，蛋白胨0～0.5g，氯化鈉0～0.5g，水1000mL，pH6.0～7.5；固體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為紅薯粉10％～30％，玉米粉5％～20％，麩皮5％～10％，磷酸二氫鉀0.01％～0.2％，硫酸鎂0.01％～0.2％，水40％～60％。2.按權(quán)利要求1所述的液固雙相發(fā)酵生產(chǎn)小克銀漢霉孢子的方法，其特征在于：將小克銀漢霉活化采用PDA斜面培養(yǎng)基或玉米粉瓊脂斜面培養(yǎng)基進(jìn)行活化，活化時(shí)間為5～7天；所述液體發(fā)酵振動(dòng)發(fā)酵的速度為150～200r/min。?3.按權(quán)利要求1所述的液固雙相發(fā)酵生產(chǎn)小克銀漢霉孢子的方法，其特征在于：所述在將液體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)好的小克銀漢霉菌絲體采用離心或過濾收集菌絲體，其離心速度為2000～3000轉(zhuǎn)/分，時(shí)間為10～20分鐘。?4.按權(quán)利要求1所述的液固雙相發(fā)酵生產(chǎn)小克銀漢霉孢子的方法，其特征在于：所述小克銀漢霉菌絲體用無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水洗滌；所述小克銀漢霉菌絲體粉碎采用電磨機(jī)將菌絲體粉碎成長(zhǎng)度在500um～800um。?5.按權(quán)利要求1所述的液固雙相發(fā)酵生產(chǎn)小克銀漢霉孢子的方法，其特征在于：所述粉碎好的菌絲體與固體發(fā)酵培養(yǎng)基混合后，攤開高度為1～3cm；所述固相發(fā)酵時(shí)培養(yǎng)基上覆蓋無(wú)菌濾紙或無(wú)菌玻璃紙。?6.按權(quán)利要求5所述的液固雙相發(fā)酵生產(chǎn)小克銀漢霉孢子的方法，其特征在于：所述無(wú)菌濾紙的厚度為0.20-2.30mm，含水量為10％～70％，無(wú)菌玻璃紙的厚度為0.03-0.60mm，含水量為10％～70％。?7.按權(quán)利要求1所述的液固雙相發(fā)酵生產(chǎn)小克銀漢霉孢子的方法，其特征在于：所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基起始pH為5.5～7.5。?