本發(fā)明公開了一種建立大蕉和巴西蕉高效體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生植株的方法。該方法在懸浮細(xì)胞體胚誘導(dǎo)前先用不含2，4-D的M2液體培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)7～10天，經(jīng)篩網(wǎng)過濾篩選出大小及生長(zhǎng)狀態(tài)較一致的細(xì)胞團(tuán)，接種于體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。預(yù)培養(yǎng)可使體胚誘導(dǎo)率及其后的植株轉(zhuǎn)換率均提高1倍左右；經(jīng)篩網(wǎng)過濾所得大小范圍為154μm～900μm的細(xì)胞團(tuán)其體胚誘導(dǎo)效果最佳；大蕉和巴西蕉細(xì)胞的最佳接種量分別為0.4ml 20％SCV和1ml 20％SCV。此外在體胚誘導(dǎo)初期于香蕉現(xiàn)有技術(shù)體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基上添加ABA和抗壞血酸，在一定程度上防止了大蕉在體胚誘導(dǎo)期間培養(yǎng)物容易褐化的現(xiàn)象，并可有效提高大蕉和巴西蕉胚性懸浮細(xì)胞的體胚發(fā)生頻率。

1.一種建立大蕉和巴西蕉高效體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生植株的方法，其特征在于包括如下步驟：(1)胚性愈傷組織的誘導(dǎo)：分別以大蕉或巴西蕉1～12梳未成熟雄花序?yàn)橥庵搀w，接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出胚性愈傷組織；(2)均一穩(wěn)定的胚性細(xì)胞懸浮系的建立：挑取步驟(1)誘導(dǎo)出的大蕉黃色小顆粒狀胚性愈傷組織或巴西蕉淺黃色小顆粒狀胚性愈傷組織，分別轉(zhuǎn)入M2液體培養(yǎng)基中，置于90～110rpm搖床上懸浮培養(yǎng)3～4個(gè)月即得分散、均質(zhì)的大蕉胚性細(xì)胞懸浮系或巴西蕉胚性細(xì)胞懸浮系；(3)體細(xì)胞胚胎的誘導(dǎo)：在體胚誘導(dǎo)前先將上述胚性懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)入不含2，4-D的M2液體培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)7～10天，隨后經(jīng)篩網(wǎng)過濾篩選出大小及生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞團(tuán)，從細(xì)胞團(tuán)中吸取0.2～2ml?20％SCV即細(xì)胞接種量接種于含1mg·L^-1ABA和5mg·L^-1抗壞血酸的體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于28±1℃黑暗中進(jìn)行體細(xì)胞胚胎的誘導(dǎo)；將誘導(dǎo)出的白色球形胚轉(zhuǎn)入去除ABA和抗壞血酸的體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)直至體胚發(fā)育成熟，得到成熟體胚；(4)體胚的萌發(fā)及其植株再生：將步驟(3)誘導(dǎo)出的成熟體胚轉(zhuǎn)入體胚萌發(fā)培養(yǎng)基中；置于28±1℃黑暗培養(yǎng)，待葉鞘抽出后，將其轉(zhuǎn)至MR生根壯苗培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，進(jìn)一步發(fā)育成健壯的香蕉小植株；所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為MS基本培養(yǎng)基+4.5μmol·L^-1生物素+18μmol·L^-1?2，4-D+5.4μmol·L^-1?NAA+5.7μmol·L^-1?IAA+87mmol·L^-1蔗糖+7g·L^-1瓊脂，pH?5.8；所述M2液體培養(yǎng)基的組成為MS基本培養(yǎng)基+4.5μmol·L^-1?2，4-D+4.1μmol·L^-1生物素+680μmol·L^-1谷氨酰胺+100mg·L^-1麥芽提取物+130mmol·L^-1蔗糖，pH?5.3；所述體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為SH大量和微量元素及其鐵鹽+MS維生素+4.5μmol·L^-1生物素+680μmol·L^-1谷氨酰胺+2mmol·L^-1脯氨酸+100mg·L^-1麥芽提取物+1.1μmol·L^-1?NAA+0.5μmol·L^-1激動(dòng)素+44μg·L^-1玉米素+29mmol·L^-1乳糖+130mmol·L^-1蔗糖+1mg.L^-1?ABA+5mg.L^-1抗壞血酸+2g·L^-1?Gelrite，pH?5.8；所述體胚萌發(fā)培養(yǎng)基的組成為MS大量元素和微量元素及其鐵鹽+Moreland?Wetmore維生素+0.2μmol·L^-1?6-BA+1.1μmol·L^-1?IAA+87mmol·L^-1蔗糖+2g·L^-1?gelrite，pH?5.8；所述MR生根壯苗培養(yǎng)基的組成為MS基本培養(yǎng)基+87mmol·L^-1蔗糖+0.1％活性炭+7g·L^-1瓊脂，pH?5.8。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種建立大蕉和巴西蕉高效體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生植株的方法，其特征在于：所述不含2，4-D的M2液體培養(yǎng)基的組成為：MS基本培養(yǎng)基+4.1μmol·L^-1生物素+680μmol·L^-1谷氨酰胺+100mg·L^-1麥芽提取物+130mmol·L^-1蔗糖，pH?5.3，高溫高壓滅菌。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種建立大蕉和巴西蕉高效體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生植株的方法，其特征在于：所述體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的ABA和抗壞血酸事先分別配置成10mg·ml^-1母液，過濾滅菌后添加到pH?5.8、經(jīng)高溫高壓滅菌后溫度降至45℃的其余培養(yǎng)基成分中混勻，分裝于直徑9.5cm的培養(yǎng)皿中，20～25ml/皿。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種建立大蕉和巴西蕉高效體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生植株的方法，其特征在于：步驟(3)中所述20％SCV懸浮細(xì)胞是按下述方法制備得到：吸取5ml懸浮細(xì)胞于15ml刻度管中，靜置10分鐘后，棄上清，將所得的細(xì)胞沉淀體積用不添加凝固劑Gelrite的體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基稀釋至5倍體積。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種建立大蕉和巴西蕉高效體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生植株的方法，其特征在于：步驟(3)中所述經(jīng)篩網(wǎng)過濾所得細(xì)胞團(tuán)的大小范圍為154μm～900μm。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種建立大蕉和巴西蕉高效體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生植株的方法，其特征在于：所述大蕉細(xì)胞的接種量為0.4ml?20％SCV；巴西蕉細(xì)胞的接種量為1ml?20％SCV。