1.一種低成本流水化生產組培苗的方法,包括以下步驟:(一)培養基的配制:??(1)?稱取以下質量分數的藥品分別置于燒杯中:KH2PO4??3.75NH4NO3???36.43KNO3???41.94CaCl2·2H2O??9.71MgSO4·7H2O??8.17在各燒杯中分別加入藥品總重量33-34倍重的純凈水溶解后,按照所列各藥品先后順序將溶液緩慢混合入更大的燒杯中,同時不斷攪拌,待用;(2)稱取以下質量分數的藥品,藥品總質量為(1)中藥品總質量的1/22:MnSO4·4H2O???10.8????????????ZnSO4·7H2O????4.17H3BO3?????????????????3.00????????????KI????????????0.40Na2MoO4·2H2O??0.12???????????CoCl2·6H2O?????0.012CuSO4·5H2O???0.012???????????FeSO4·7H2O????13.47Na2—EDTA?????18.07??????????煙酸???????????0.24維生素B6?????0.24???????????維生素B1???????0.05甘氨酸????????0.97???????????其余為肌醇將以上藥品置于燒杯中,加藥品總重量1000倍重的純凈水溶解,緩慢倒入(1)中配制好的溶液中,攪拌混勻后,待用;(3)?配制濃度為0.2mg/ml的6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)溶液;(4)稱取(2)中藥品總重量30倍的瓊脂、150倍的蔗糖倒入(1)步驟中的溶液中攪拌,加熱沸騰后,根據不同植物的試管苗加入不同體積的(3)配制的6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)溶液,最后按(1)中藥品總重量計,每4.53g定容到1000mL,再逐滴滴入1N氫氧化鉀溶液調節培養基的PH值到5.8;(二)?分裝與滅菌:??將配制好的培養基趁熱分裝入聚丙烯薄膜袋中,用小夾子固定在一個用鐵絲做成的簡易框架上使其直立,然后放入高壓滅菌鍋消毒,滅菌時間在121℃保持18~20min即可;??(三)無菌操作:(1)無菌操作實驗器具和材料的準備:包括超凈工作臺的無菌處理,消毒雙手及切割刀和鑷子;(2)滅菌結束后,將簡易架子放在超凈工作臺上,整理薄膜袋使其能夠直立,用塑料袋封口機封住袋口,薄膜袋靜置至培養基凝固,待用;(3)流水作業進行外植體的分離與接種:裝有試管苗的培養袋、操作器具、培養皿及塑料袋封口機用新潔爾滅或75%酒精擦拭消毒后放入超凈工作臺內;1號組培技術工人在超凈工作臺內將試管苗從培養袋中取出,置無菌濾紙上,用切割刀按照不同試管苗的繁殖要求對待繁殖的試管苗進行切割;同時2號技術工人剪開已灌裝培養基且培養基已凝固的薄膜袋封口處,用消毒過并冷卻的鑷子將1號組培技術工人切割的繁殖的試管苗夾入薄膜袋內;3號組培技術工人將2號組培技術工人放入的塊莖或莖段微插入培養基中,若是葉柄水平放置;4號組培技術工人將3號組培技術工人做好的薄膜袋,用塑料袋封口機將其薄膜袋封口并編號,放置于培養室中的培養架上;(四)按(三)所述步驟進行無菌操作,將薄膜袋封裝的試管苗放置于培養室中的培養架上進行組織培養,組織培養的照明光源采用節能燈。2.根據權利要求1所述的一種低成本流水化生產組培苗的方法,其特征在于:組織培養的照明光源采用11瓦的節能燈。
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