1.一種開放式培養甘蔗脫毒種苗的方法,包括種莖熱水處理、抑菌劑的配制、器皿消毒、接種操作、誘導培養、增殖培養、生根培養、瓶苗移栽,其特征在于: (1)種莖熱水處理:選擇無病蟲害植株,在蔗莖中部取具有飽滿蔗芽的雙芽莖段,洗凈并用800~1000倍稀釋的多菌靈浸泡25~30min,清水洗凈后入恒溫水浴鍋中,50~52℃熱水處理28~30min,期間不斷攪拌使蔗莖受熱均勻;然后,取出蔗莖用泥炭土覆蓋,厚度以剛露出蔗芽為宜,保持濕潤,并在25~38℃和1200?~1500?lx光照條件下培養; ??(2)抑菌劑的配制:使用益培隆殺菌劑配制抑菌劑1號和抑菌劑2號;抑菌劑1號的配制方法:在益培隆殺菌劑A瓶中加入10~20ml蒸餾水稀釋后與B瓶混合,再用蒸餾水定容到100?ml,即為抑菌劑1號;抑菌劑2號的配制方法:在益培隆殺菌劑A瓶中加入10~20?ml蒸餾水稀釋后與B瓶混合,再加成熟蒜頭的汁液20~60?ml,用蒸餾水定容到100?ml,即為抑菌劑2號; ??(3)器皿消毒:將培養瓶及瓶蓋在體積比為0.3%~0.5%抑菌劑1號的水溶液中浸泡不少于10h備用; ??(4)接種操作:接種室內用紫外燈照射消毒,接種的器具用體積比為75%的酒精消毒后,放在體積比為0.5%的抑菌劑1號溶液中浸泡不少于0.5h,接種過程始終浸泡在體積比為0.5%的抑菌劑1號溶液中; ??(5)誘導培養:取健壯的甘蔗植株,從最高肥厚帶往下30?cm處切下,用體積比為75%的酒精表面消毒;剝離外層葉鞘,取含生長點0.5~1cm長的芽尖,接種到誘導培養基;培養室溫度為25~28?℃,每日光照12h,光照強度為1200?~?1500?lx;所述誘導培養基為MS+6-BA?2.0?mg/L+KT?0.5~2.0?mg/L+抑菌劑2號5?ml/L+蔗糖30?g/L+瓊脂粉3.5?g/L,pH5.8;所述MS培養基為1962年,Murashige和Skoog公開的MS培養基;所述6-BA,指6-芐氨基嘌吟;所述KT,指6-糠氨基嘌吟;(6)增殖培養:將外植體誘導出的叢生芽接種到MS+6-BA1.0?mg/L+KT?0.5~2.0?mg/L+抑菌劑2號3?ml/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉3.5g/L的增殖培養基中,15天轉接一次;培養室溫度為25~28?℃,每日光照12h,光照強度為1200?~?1500?lx; ?(7)生根培養:當苗高不低于2.0cm、且莖粗不小于0.2cm,轉入1/2MS+NAA?3?mg/L+活性炭500?mg/L+抑菌劑2號3ml/L+蔗糖40?g/L+瓊脂粉3.5?g/L的生根培養基中,20~30天移栽;培養室溫度為25~28?℃,每日光照12h,光照強度為1200?~1500?lx;(8)瓶苗移栽:將生根苗取出后,洗凈根部的培養基,用800倍的多菌靈浸泡30min后移栽至穴盤,放到大棚內,移栽的基質為河沙,種植后澆透水,大棚上層用50%以上的遮光網遮蓋,移栽的環境溫度為20~32℃。2.根據權利要求1所述的一種開放式培養甘蔗脫毒種苗的方法,其特征在于:(1)種莖熱水處理:將蔗莖洗凈并用850倍稀釋的多菌靈浸泡30min,清水洗凈后入恒溫水浴鍋中,50℃熱水處理30min,取出蔗莖,在30℃和1200?~1500?lx光照條件下培養;(2)抑菌劑的配制:抑菌劑2號的配制方法,在益培隆殺菌劑A瓶中加入10?ml蒸餾水稀釋后與B瓶混合,再加成熟蒜頭的汁液50?ml,用蒸餾水定容到100?ml; ??(3)器皿消毒:培養瓶及瓶蓋在體積比為0.5%抑菌劑1號的水溶液中浸泡10h后取出備用; ???(4)接種操作:將接種器具放在體積比為0.5%的抑菌劑1號溶液浸泡0.5h;(5)誘導培養:誘導培養基為?MS+6-BA?2.0?mg/L+KT?0.5?mg/L+抑菌劑2號5?ml/L+蔗糖30?g/L+瓊脂粉3.5?g/L;?(6)增殖培養:增殖培養基為?MS+6-BA1.0?mg/L+KT?0.5?mg/L+抑菌劑2號3?ml/L+蔗糖30?g/L+瓊脂粉3.5?g/L;(7)生根培養:當苗高達到2.0cm、且莖粗達到0.2cm以上,轉入生根培養基中培養;(8)瓶苗移栽:瓶苗移栽的環境溫度為22~30?℃。3.根據權利要求1所述的一種開放式培養甘蔗脫毒種苗的方法,其特征在于,所述增殖培養基為MS+6-BA1.0?mg/L+KT?1.5?mg/L+抑菌劑2號3?ml/L+蔗糖30?g/L+瓊脂粉3.5?g/L。
展開