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利用微生物轉化制備9α-羥基-雄烯二酮的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-16
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310342583.1 
  • 技術(專利)名稱 利用微生物轉化制備9α-羥基-雄烯二酮的方法 
  • 項目單位 中國科學院上海高等研究院
  • 發明人 張保國,魏長龍,曾俊華,王珊,史吉平,姜標 
  • 行業類別 藥品-化學藥品
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 吳玥玥
  • 發布時間 2021-10-16  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種利用微生物轉化制備9α?羥基?雄烯二酮的方法,包括:1)將紅平紅球菌作為生產菌種,并接種于種子培養基中,培養,得種子;2)將種子接種于轉化培養基中,培養,得發酵液;3)在發酵液中投入雄烯二酮溶液,繼續培養,得到轉化液,并檢測轉化液中的9α?羥基?雄烯二酮含量;4)分離和提取轉化液中的9α?羥基?雄烯二酮。本發明的方法具有高效專一、環保、投料濃度高、轉化率高、產物純度高、收率高、成本低等優點,而且整個制備過程簡單,經濟實用,具有廣泛的應用前景,而且對于擴展甾體原料藥物雄烯二酮的用途有著非常重要的意義。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種利用微生物轉化制備9α-羥基-雄烯二酮的方法,其特征在于,包括步驟:
    1)將紅平紅球菌作為生產菌種,并接種于含碳源和氮源的種子培養基中,在150~350rpm
    轉速下,26~35℃培養12~30h,得適于接種的種子;
    其中,紅平紅球菌為紅平紅球菌ATCC 14887;
    2)將步驟1)所得種子接種于轉化培養基中,在150~350rpm轉速下,26~35℃培養
    12~30h,得發酵液;
    所述轉化培養基的配方為:水、葡萄糖0.5g/100mL~1.5g/100mL、蛋白胨0.2g/100mL~
    1g/100mL、玉米漿2.5g/100mL~5.0g/100mL、磷酸二氫鉀0.02g/100mL~0.08g/100mL和硫
    酸鎂0.01g/100mL~0.05g/100mL;
    3)在步驟2)所得的發酵液中投入雄烯二酮溶液,繼續在150~350rpm轉速下,26~35℃
    培養48~96h,得到轉化液,并檢測轉化液中的9α-羥基-雄烯二酮含量;
    其中,雄烯二酮溶液中的第一溶劑選自甲醇、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺或它們的組合;
    雄烯二酮的投入量為20~45g/L發酵液;
    4)分離和提取步驟3)所得的轉化液中的9α-羥基-雄烯二酮;
    其中,步驟4)的具體步驟包括:
    A、轉化結束后,將轉化液減壓過濾,濾餅加入第二溶劑,加熱回流至澄清;然后,過
    濾,保留濾液;
    其中,第二溶劑包括:甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷或甲基異丁酮;
    B、在步驟A所得濾液中,加入相當于投料底物雄烯二酮10wt~15wt%的活性碳,在55~
    105℃下攪拌脫色1~2h后,降至室溫,過濾去除活性炭,得第一濾液,并用第二溶劑洗滌濾
    餅,得第二濾液,將第一濾液與第二濾液合并,然后,在40~60℃下減壓濃縮、析晶、過濾、
    烘干,得9α-羥基-雄烯二酮。
    2.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟1)中,含碳源和氮源的種子培養
    基中,碳源為葡萄糖1.2g/100mL;氮源為蛋白胨0.5g/100mL,酵母膏1.3g/100mL~
    1.4g/100mL;種子培養基的pH為7.0~7.2。
    3.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟2)中,接種量為5~8vol%。
    4.如權利要求3所述的方法,其特征在于:所述轉化培養基的pH為6.8~7.5。
    5.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟3)中,雄烯二酮的投入量為20~
    45g/L發酵液;雄烯二酮溶液的投入方法為:用溶劑將雄烯二酮在80~90℃溶解后,在無菌
    條件下,投入至發酵液中;
    檢測轉化液中的9α-羥基-雄烯二酮含量的方法包括:通過薄層層析或高效液相色譜進行
    檢測。
    6.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟3)中,以雄烯二酮轉化成9α-羥
    基-雄烯二酮的轉化率達到90%以上時作為轉化終點。
    7.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟A中,濾餅還能重復加入第二溶
    劑,以獲得濾液。
    展開

專利技術附圖

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