1.一種利用微生物轉化制備9α-羥基-雄烯二酮的方法,其特征在于,包括步驟:
1)將紅平紅球菌作為生產菌種,并接種于含碳源和氮源的種子培養基中,在150~350rpm
轉速下,26~35℃培養12~30h,得適于接種的種子;
其中,紅平紅球菌為紅平紅球菌ATCC 14887;
2)將步驟1)所得種子接種于轉化培養基中,在150~350rpm轉速下,26~35℃培養
12~30h,得發酵液;
所述轉化培養基的配方為:水、葡萄糖0.5g/100mL~1.5g/100mL、蛋白胨0.2g/100mL~
1g/100mL、玉米漿2.5g/100mL~5.0g/100mL、磷酸二氫鉀0.02g/100mL~0.08g/100mL和硫
酸鎂0.01g/100mL~0.05g/100mL;
3)在步驟2)所得的發酵液中投入雄烯二酮溶液,繼續在150~350rpm轉速下,26~35℃
培養48~96h,得到轉化液,并檢測轉化液中的9α-羥基-雄烯二酮含量;
其中,雄烯二酮溶液中的第一溶劑選自甲醇、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺或它們的組合;
雄烯二酮的投入量為20~45g/L發酵液;
4)分離和提取步驟3)所得的轉化液中的9α-羥基-雄烯二酮;
其中,步驟4)的具體步驟包括:
A、轉化結束后,將轉化液減壓過濾,濾餅加入第二溶劑,加熱回流至澄清;然后,過
濾,保留濾液;
其中,第二溶劑包括:甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷或甲基異丁酮;
B、在步驟A所得濾液中,加入相當于投料底物雄烯二酮10wt~15wt%的活性碳,在55~
105℃下攪拌脫色1~2h后,降至室溫,過濾去除活性炭,得第一濾液,并用第二溶劑洗滌濾
餅,得第二濾液,將第一濾液與第二濾液合并,然后,在40~60℃下減壓濃縮、析晶、過濾、
烘干,得9α-羥基-雄烯二酮。
2.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟1)中,含碳源和氮源的種子培養
基中,碳源為葡萄糖1.2g/100mL;氮源為蛋白胨0.5g/100mL,酵母膏1.3g/100mL~
1.4g/100mL;種子培養基的pH為7.0~7.2。
3.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟2)中,接種量為5~8vol%。
4.如權利要求3所述的方法,其特征在于:所述轉化培養基的pH為6.8~7.5。
5.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟3)中,雄烯二酮的投入量為20~
45g/L發酵液;雄烯二酮溶液的投入方法為:用溶劑將雄烯二酮在80~90℃溶解后,在無菌
條件下,投入至發酵液中;
檢測轉化液中的9α-羥基-雄烯二酮含量的方法包括:通過薄層層析或高效液相色譜進行
檢測。
6.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟3)中,以雄烯二酮轉化成9α-羥
基-雄烯二酮的轉化率達到90%以上時作為轉化終點。
7.如權利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟A中,濾餅還能重復加入第二溶
劑,以獲得濾液。
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