本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)合成技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種蜂毒素的制備方法。本發(fā)明方法步驟如下：(1)將鈣調(diào)蛋白、smt3(SUMO family protein)以及蜂毒素三者核苷酸序列與表達(dá)載體組成的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌菌株；(2)將(1)所得菌株接種于TB培養(yǎng)基或改進(jìn)后的TB培養(yǎng)基，IPTG過(guò)夜誘導(dǎo)表達(dá)；(3)將(2)所得菌體超聲破碎、離心，上清經(jīng)Ni?NTA親和層析、sumo蛋白酶酶切，在1.0mM EDTA存在下再次經(jīng)Ni?NTA親和層析以及Sephadex G?25分子篩分離獲得純度高達(dá)95％的蜂毒素，產(chǎn)量可達(dá)每升菌體16mg蜂毒素。本方法能克服目前蜂毒素產(chǎn)量低、成本高、無(wú)法滿足對(duì)蜂毒素應(yīng)用需求的缺陷，是目前高產(chǎn)量、低成本的表達(dá)方法。

1.一種蜂毒素的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將鈣調(diào)蛋白(calmodulin)-smt3-蜂毒素(melittin)的編碼核苷酸序列與表達(dá)載體
形成的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌菌株；
(2)將(1)所得菌株接種于TB培養(yǎng)基或改進(jìn)后的TB培養(yǎng)基，IPTG誘導(dǎo)過(guò)夜表達(dá)；所述改
進(jìn)后的TB培養(yǎng)基組分包括：蛋白胨12g/L、酵母提取物24g/L，甘油10mL/L，磷酸鹽0.1mM，葡
萄糖5g/L；
(3)將(2)所得菌體通過(guò)超聲破碎、離心、上清經(jīng)過(guò)Ni-NTA親和層析，sumo蛋白酶酶切，
在1.0mM EDTA存在下再次經(jīng)過(guò)Ni-NTA親和層析以及Sephadex G-25分子篩分離獲得目標(biāo)
肽；
所述鈣調(diào)蛋白-smt3-蜂毒素的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.如權(quán)利要求1所述的一種蜂毒素的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的表達(dá)載
體是pMAL-c2x、pET28a或者pET-30a。
3.如權(quán)利要求1所述的一種蜂毒素的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所表述的大腸
桿菌是BL21(DE3)plysS、Transsetta(DE3)或Transsetta(DE3)plysS。
4.如權(quán)利要求1所述的一種蜂毒素的制備方法，其特征在于，步驟(3)中超聲破碎用反
復(fù)凍融法或溶菌酶酶解替代。