本發明公開了一種胞苷高產微生物菌株的高通量篩選方法。它是將單菌落接種于裝有液體種子培養基的深孔板I中，搖床震蕩培養，然后將深孔板I孔中的種子液對應接種到裝有發酵培養基的深孔板II中，搖床震蕩培養后，將深孔板離心，取上清液測胞苷含量。在酶標板的微孔中加入發酵液上清、緩沖液和適量的胞苷脫氨酶，于30?40℃溫浴反應10?40 min；反應結束后立即加入反應液A和反應液B，于30?40℃溫浴反應20?50 min，然后采用酶標儀測定反應液的吸光度值，根據標準曲線和發酵液上清的稀釋倍數計算胞苷產量。本發明實現了高通量培養、發酵液的高通量制備及胞苷的高通量測定的目標。

1.一種對胞苷生產菌發酵培養物中胞苷產量的檢測方法，其特征在于按如下的步驟進行：(1)挑取胞苷生產菌的單菌落，接種于裝有液體種子培養基的深孔板I中，蓋上深孔板蓋子，于30-40℃、300-800rpm搖床培養8-14h；(2)將深孔板I孔中的種子液對應接種到裝有發酵培養基的深孔板II中，30-40℃、300-800rpm搖床培養8-48h；(3)將深孔板II放置于孔板離心機，5000-10000×g離心5-30min，以微量化梯度稀釋法將發酵液上清稀釋；(4)在酶標板的微孔中加入稀釋的發酵液上清、緩沖液和適量的胞苷脫氨酶，以不加胞苷脫氨酶的實驗為空白對照，于30-40℃溫浴反應10-40min；(5)反應結束后立即加入反應液A和反應液B，且反應液A和B的加入順序為反應液A在前，B在后，然后于30-40℃溫浴反應20-50min；(6)步驟(5)反應結束后，采用酶標儀測定反應液的吸光度，根據發酵培養基中的胞苷標準曲線和發酵液上清的稀釋倍數計算胞苷產量；其中，所述反應液A包含：氫氧化鈉20-30g/L、水楊酸45-75g/L和亞硝基鐵氰化鈉1-3g/L；反應液B包含：次氯酸鈉40-60ml/L，步驟(3)反應結束后產生的藍色物質的檢測波長為695-700nm，或所述反應液A包含苯酚15-30ml/L和亞硝基鐵氰化鈉0.8-3g/L，反應液B為包含氫氧化鈉10-15g/L和次氯酸鈉20-40ml/L，步驟(3)反應結束后產生的藍色物質的檢測波長為625-630nm。2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述的發酵液上清中不能含有菌體，稀釋后的發酵液上清與所述緩沖液混合均勻，稀釋后的發酵液上清中胞苷的濃度為0.01-10mM。3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述酶反應所用的緩沖液為Tris-HCl緩沖液、磷酸二氫鉀緩沖液、磷酸鈉緩沖液和HEPES緩沖液之中的一種，所述緩沖液的pH為7.0-8.0，濃度為0.01-0.1M。4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述胞苷脫氨酶來源于枯草芽孢桿菌或大腸桿菌，反應時加入1-20U胞苷脫氨酶。5.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述步驟(4)發酵液上清與緩沖液的體積比為1:1-4，所述步驟(5)反應液A與B的體積比為1:1-4。6.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述發酵液上清中胞苷含量與所述發酵培養基中的胞苷標準曲線的建立同時進行。