一種霍山石斛組織培養一步成苗的方法，包括下述步驟：固體培養基的制備，其中固體營養基的配方包括：大量元素、微量元素、鐵鹽、有機成分、激素以及添加物；液體營養液的制備：液體營養液的配方按照固體培養基的配方，不添加激素、瓊脂、矮壯素和香蕉蘋果提取液；霍山石斛果莢的選擇和消毒；霍山石斛種子懸浮液的制備；無菌播種；種苗培養；出苗。采用上述方法進行霍山石斛的培育的優點在于：縮短了霍山石斛的培養周期，6個月可以出苗，即在種子成熟的10月份播種，第二年的4月份就可以出苗，剛好趕在栽苗期；降低了50％的霍山石斛組培育苗的生產成本，減少了種植投入；增加栽培的成活率和發芽率。

1.一種霍山石斛組織培養一步成苗的方法，其特征在于：包括下述步驟：
步驟一：固體培養基的制備，其中固體營養基的配方包括：
以下組成及配比的大量元素：
硝酸鉀KNO₃：300～500mg/L；
硫酸銨(NH₄)₂SO₄：400～600mg/L；
磷酸二氫鉀KH₂PO₄：300～500mg/L；
硫酸鎂MgSO₄.7H₂O：200～300mg/L；
硝酸鈣Ca(NO₃)₂：400～500mg/L；
以下組成及配比的微量元素：
碘化鉀KI：0.65～0.95mg/L；
硼酸H₃BO₃：5.3～8.9mg/L；
硫酸錳MnSO₄.4H₂O：19～25mg/L；
硫酸鋅ZnSO₄.7H₂O：6.5～9.8mg/L；
鉬酸鈉Na₂MoO₄.2H₂O：0.10～0.45mg/L；
硫酸銅CuSO₄.5H₂O：0.010～0.035mg/L；
氯化鈷CoCl₂：0.010～0.035mg/L；
以下組成及配比的鐵鹽：
乙二胺四乙酸二鈉Na₂.EDTA：25.5～40.5mg/L；
硫酸亞鐵FeSO₄.7H₂O：22.5～30.5mg/L；
以下組成及配比的有機成分：
肌醇C₆H₁₂O₆：90～110mg/L；
甘氨酸C₂H₅NO₂：1～3mg/L；
鹽酸硫胺素VB1：0.05～0.15mg/L；
鹽酸吡哆醇VB6：0.4～0.6mg/L；
煙酸VB5或VPP：0.4～0.6mg/L；
以下組成及配比的激素：
萘乙酸NAA：0.6～0.9mg/L；
6-芐氨基嘌呤6-BA：0.4～0.6mg/L；
以下組成及配比的添加物：
蔗糖：25～35g/L；
瓊脂：3.5～5.5mg/L；
花寶1號：1.5～2.5mg/L；
香蕉蘋果混合提取液2～4:1～2：120～200g/L；
所述固體培養基的生產流程包括：水加熱沸騰后，加入上述配方的瓊脂，形成瓊脂初混
液，將上述組成及配比的添加物加水加熱粉碎并浸出形成添加物浸出液，該添加物浸出液
與上述瓊脂初混液混合形成瓊膠液，在該瓊膠液內按上述組分和配方加入大量元素、微量
元素、鐵鹽、有機成分、激素，然后攪拌均勻，形成培養基初液，調節ph值至5.6-6.0，溫度維
持在50℃到70℃之間進行分裝，分裝后100℃～150℃滅菌10min～30min備用；
步驟二：液體營養液的制備：液體營養液的配方按照固體培養基的配方，不添加激素、
瓊脂、花寶1號和香蕉蘋果提取液，所述液體營養液的生產流程包括：水加熱沸騰后，按照液
體營養液的配方加入各組分，混合定容后，調節ph值至5.6-6.0，溫度維持在50℃到70℃之
間進行分裝，分裝后100℃～150℃滅菌10min～30min備用；
步驟三：霍山石斛果莢的選擇和消毒：選擇當年成熟飽滿的霍山石斛碩果，表面無病
斑、蟲蛀和開裂，將采收的霍山石斛碩果進行清理，去除碩果表面枯萎的殘花，并用清水反
復沖洗，然后放入75％的酒精中至淹沒為止，浸泡20min～50min，然后放在無菌的接種盤中
在無菌操作臺上晾干，備用；
步驟四：霍山石斛種子懸浮液的制備：無菌室超凈工作臺面上，用手術刀在碩果的一端
切開一個小口子，用鑷子夾住果柄，將切口對準瓶口，用另一只鑷子輕輕敲打夾住果柄的鑷
子，將種子均勻的散落營養液中，并在無菌的環境下用磁力攪拌器將懸浮液攪拌均勻，并用
懸浮計數法在顯微鏡下用計數板檢測種子在懸浮液的密度，要求達到80～120粒/ml的密
度；
步驟五：無菌播種：在無菌操作臺上，用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml，放入
固體培養基中，蓋好瓶蓋緩慢晃動，直至瓶內的懸浮液均勻的平鋪在培養基表面為止，放入
培養框中，送至培養室培養；
步驟六：種苗培養，剛開始10天是種子萌發階段，采用暗培養，無光照，溫度控制在24℃
～27℃，10天-70天，為發芽階段，這一時間段內，保證光照時間7～9小時，光照強度
1500lux-2000lux，溫度控制在25℃～28℃，70天～120天，為發生根階段，這一時間段內，保
證光照時間9～12小時，光照強度1800lux-2100lux，溫度控制在24℃～27℃，120天～180
天，為壯苗階段，這一時間段內，保證光照時間9～12小時，光照強度2500lux-3000lux，溫度
控制在24℃～27℃；在培養過程中，若發現固體培養基被種苗吸收完不能夠滿足種苗繼續
生長需要時，用無菌移液槍在無菌操作臺上將滅菌后的液體營養液加至培養瓶中，供應種
苗繼續生長；
步驟七：出苗。
2.根據權利要求1所述的霍山石斛組織培養一步成苗的方法，其特征在于：步驟七的出
苗標準為：用于栽培的霍山石斛商品苗為非污染、無爛莖、爛根；葉片2片以上，正常展開，葉
色嫩綠或翠綠，根1條以上且單位瓶內的合格苗占總苗量的95％以上。
3.根據權利要求1所述的霍山石斛組織培養一步成苗的方法，其特征在于：所述步驟一
至步驟六具體為：
步驟一：固體培養基的制備，其中固體營養基的配方包括：
以下組成及配比的大量元素：
硝酸鉀KNO₃：400mg/L；
硫酸銨(NH₄)₂SO₄：500mg/L；
磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)：400mg/L；
硫酸鎂MgSO₄.7H₂O：250mg/L；
硝酸鈣Ca(NO₃)₂：450mg/L；
以下組成及配比的微量元素：
碘化鉀KI：0.83mg/L；
硼酸H₃BO₃：6.2mg/L；
硫酸錳MnSO₄.4H₂O：22.3mg/L；
硫酸鋅ZnSO₄.7H₂O：8.6mg/L；
鉬酸鈉Na₂MoO₄.2H₂O：0.25mg/L；
硫酸銅CuSO₄.5H₂O：0.025mg/L；
氯化鈷CoCl₂：0.025mg/L；
以下組成及配比的鐵鹽：
乙二胺四乙酸二鈉Na₂.EDTA：37.3mg/L；
硫酸亞鐵FeSO₄.7H₂O：27.8mg/L；
以下組成及配比的有機成分：
肌醇C₆H₁₂O₆：100mg/L；
甘氨酸C₂H₅NO₂：2mg/L；
鹽酸硫胺素VB1：0.1mg/L；
鹽酸吡哆醇VB6：0.5mg/L；
煙酸VB5或VPP：0.5mg/L；
以下組成及配比的激素：
萘乙酸NAA：0.8mg/L；
6-芐氨基嘌呤6-BA：0.5mg/L；
以下組成及配比的添加物：
蔗糖：30g/L；
瓊脂：4.5mg/L；
花寶1號：2.0mg/L；
香蕉蘋果混合提取液3:1：150g/L；
所述固體培養基的生產流程包括：水加熱沸騰后，加入上述配方的瓊脂，形成瓊脂初混
液，將上述組成及配比的添加物加水加熱粉碎并浸出形成添加物浸出液，該添加物浸出液
與上述瓊脂初混液混合形成瓊膠液，在該瓊膠液內按上述組分和配方加入大量元素、微量
元素、鐵鹽、有機成分、激素，然后攪拌均勻，形成培養基初液，調節ph值至5.4，溫度維持在
60℃按照實際操作需要進行分裝，分裝后121℃滅菌20min備用；
步驟二：液體營養液的制備：液體營養液的配方按照固體培養基的配方，不添加激素、
瓊脂、花寶1號和香蕉蘋果提取液，所述液體營養液的生產流程包括：水加熱沸騰后，按照液
體營養液的配方加入各組分，混合定容后，調節ph值至5.4，溫度維持在60℃按照實際操作
需要進行分裝，分裝后121℃滅菌20min備用；
步驟三：霍山石斛果莢的選擇和消毒：選擇當年成熟保暖的霍山石斛果實，表面無病
斑、蟲斑，將采收的霍山石斛果莢進行手工清理，去除碩果表面枯萎的殘花，并用清水反復
沖洗，然后放入75％的酒精中至淹沒為止，浸泡30min，然后放在無菌的接種盤中在無菌操
作臺上晾干，備用；
步驟四：霍山石斛種子懸浮液的制備：無菌室超凈工作臺面上，用手術刀在果莢的尾部
切開一個小口子，用鑷子夾住果柄，將切口對準瓶口，用另一只鑷子輕輕敲打夾住果柄的鑷
子，將種子均勻的散落營養液中，并在無菌的環境下用磁力攪拌機懸浮液攪拌均勻，并用懸
浮計數法在顯微鏡下用計數板檢測種子在懸浮液的密度，達到100粒/ml的密度；
步驟五：無菌播種：在無菌操作臺上，用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml，放入
固體培養基中，蓋好瓶蓋緩慢晃動，直至瓶內的懸浮液均勻的平鋪在培養基表面為止，放入
培養框中，送至培養室培養；
步驟六：種苗培養，剛開始10天是種子萌發階段，采用暗培養，無光照，溫度控制在25℃
±2℃，10天-70天，為發芽階段，這一時間段內，保證光照時間8小時，光照強度1500lux-
2000lux，溫度控制在27℃±2℃，70天-120天，為發側芽階段，這一時間段內，保證光照時間
10小時，光照強度2000lux，溫度控制在25℃±2℃，120天-180天，為壯苗階段，這一時間段
內，保證光照時間10小時，光照強度2500lux-3000lux，溫度控制在25℃±2℃，180天-200
天，為煉苗階段，這一時間段內，采用自然光，光照強度為8000lux以下，溫度控制在32℃以
下，在培養過程中，若發現固體培養基被種苗吸收完不能夠滿足種苗繼續生長需要時，用無
菌移液槍在無菌操作臺上將滅菌后的液體營養液加至培養瓶中，供應種苗繼續生長。
4.根據權利要求1所述的霍山石斛組織培養一步成苗的方法，其特征在于：所述步驟一
至步驟六具體為：
步驟一：固體培養基的制備，其中固體營養基的配方包括：
以下組成及配比的大量元素：
硝酸鉀KNO₃：500mg/L；
硫酸銨(NH₄)₂SO₄：600mg/L；
磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)：500mg/L；
硫酸鎂MgSO₄.7H₂O：300mg/L；
硝酸鈣Ca(NO₃)₂：500mg/L；
以下組成及配比的微量元素：
碘化鉀KI：0.95mg/L；
硼酸H₃BO₃：8.9mg/L；
硫酸錳MnSO₄.4H₂O：25mg/L；
硫酸鋅ZnSO₄.7H₂O：6.5mg/L；
鉬酸鈉Na₂MoO₄.2H₂O：0.10mg/L；
硫酸銅CuSO₄.5H₂O：0.010mg/L；
氯化鈷CoCl₂：0.035mg/L；
以下組成及配比的鐵鹽：
乙二胺四乙酸二鈉Na₂.EDTA：40.5mg/L；
硫酸亞鐵FeSO₄.7H₂O：22.5mg/L；
以下組成及配比的有機成分：
肌醇C₆H₁₂O₆：110mg/L；
甘氨酸C₂H₅NO₂：1mg/L；
鹽酸硫胺素VB1：0.15mg/L；
鹽酸吡哆醇VB6：0.6mg/L；
煙酸VB5或VPP：0.6mg/L；
以下組成及配比的激素：
萘乙酸NAA：0.9mg/L；
6-芐氨基嘌呤6-BA：0.6mg/L；
以下組成及配比的添加物：
蔗糖：35g/L；
瓊脂：3.5mg/L；
花寶1號：2.5mg/L；
香蕉蘋果混合提取液2～4:1～2：120g/L；
所述固體培養基的生產流程包括：水加熱沸騰后，加入上述配方的瓊脂，形成瓊脂初混
液，將上述組成及配比的添加物加水加熱粉碎并浸出形成添加物浸出液，該添加物浸出液
與上述瓊脂初混液混合形成瓊膠液，在該瓊膠液內按上述組分和配方加入大量元素、微量
元素、鐵鹽、有機成分、激素，然后攪拌均勻，形成培養基初液，調節ph值至6，溫度維持在70
℃按照實際操作需要進行分裝，分裝后150℃滅菌10min備用；
步驟二：液體營養液的制備：液體營養液的配方按照固體培養基的配方，不添加激素、
瓊脂、花寶1號和香蕉蘋果提取液，所述液體營養液的生產流程包括：水加熱沸騰后，按照液
體營養液的配方加入各組分，混合定容后，調節ph值至6，溫度維持在70℃按照實際操作需
要進行分裝，分裝后150℃滅菌10min備用；
步驟三：霍山石斛果莢的選擇和消毒：選擇當年成熟保暖的霍山石斛果實，表面無病
斑、蟲斑，將采收的霍山石斛果莢進行手工清理，去除碩果表面枯萎的殘花，并用清水反復
沖洗，然后放入75％的酒精中至淹沒為止，浸泡20min，然后放在無菌的接種盤中在無菌操
作臺上晾干，備用；
步驟四：霍山石斛種子懸浮液的制備：無菌室超凈工作臺面上，用手術刀在果莢的尾部
切開一個小口子，用鑷子夾住果柄，將切口對準瓶口，用另一只鑷子輕輕敲打夾住果柄的鑷
子，將種子均勻的散落營養液中，并在無菌的環境下用磁力攪拌機懸浮液攪拌均勻，并用懸
浮計數法在顯微鏡下用計數板檢測種子在懸浮液的密度，達到120粒/ml的密度；
步驟五：無菌播種：在無菌操作臺上，用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml，放入
固體培養基中，蓋好瓶蓋緩慢晃動，直至瓶內的懸浮液均勻的平鋪在培養基表面為止，放入
培養框中，送至培養室培養；
步驟六：種苗培養，剛開始10天是種子萌發階段，采用暗培養，無光照，溫度控制在27
℃，10天-70天，為發芽階段，這一時間段內，保證光照時間9小時，光照強度1500lux，溫度控
制在25℃，70天-120天，為發側芽階段，這一時間段內，保證光照時間9小時，光照強度
2100lux，溫度控制在27℃，120天-180天，為壯苗階段，這一時間段內，保證光照時間12小
時，光照強度2500lux，溫度控制在27℃，180天-200天，為煉苗階段，這一時間段內，采用自
然光，光照強度為8000lux以下，溫度控制在32℃以下，在培養過程中，若發現固體培養基被
種苗吸收完不能夠滿足種苗繼續生長需要時，用無菌移液槍在無菌操作臺上將滅菌后的液
體營養液加至培養瓶中，供應種苗繼續生長。
5.根據權利要求1所述的霍山石斛組織培養一步成苗的方法，其特征在于：所述步驟一
至步驟六具體為：
步驟一：固體培養基的制備，其中固體營養基的配方包括：
以下組成及配比的大量元素：
硝酸鉀KNO₃：300mg/L；
硫酸銨(NH₄)₂SO₄：400mg/L；
磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)：300mg/L；
硫酸鎂MgSO₄.7H₂O：200mg/L；
硝酸鈣Ca(NO₃)₂：400mg/L；
以下組成及配比的微量元素：
碘化鉀KI：0.65mg/L；
硼酸H₃BO₃：5.3mg/L；
硫酸錳MnSO₄.4H₂O：19mg/L；
硫酸鋅ZnSO₄.7H₂O：9.8mg/L；
鉬酸鈉Na₂MoO₄.2H₂O：0.45mg/L；
硫酸銅CuSO₄.5H₂O：0.035mg/L；
氯化鈷CoCl₂：0.01mg/L；
以下組成及配比的鐵鹽：
乙二胺四乙酸二鈉Na₂.EDTA：25.5mg/L；
硫酸亞鐵FeSO₄.7H₂O：30.5mg/L；
以下組成及配比的有機成分：
肌醇C₆H₁₂O₆：90mg/L；
甘氨酸C₂H₅NO₂：3mg/L；
鹽酸硫胺素VB1：0.05mg/L；
鹽酸吡哆醇VB6：0.4mg/L；
煙酸VB5或VPP：0.4mg/L；
以下組成及配比的激素：
萘乙酸NAA：0.6mg/L；
6-芐氨基嘌呤6-BA：0.4mg/L；
以下組成及配比的添加物：
蔗糖：25g/L；
瓊脂：5.5mg/L；
花寶1號：1.5mg/L；
香蕉蘋果混合提取液2～4:1～2：200g/L
所述固體培養基的生產流程包括：水加熱沸騰后，加入上述配方的瓊脂，形成瓊脂初混
液，將上述組成及配比的添加物加水加熱粉碎并浸出形成添加物浸出液，該添加物浸出液
與上述瓊脂初混液混合形成瓊膠液，在該瓊膠液內按上述組分和配方加入大量元素、微量
元素、鐵鹽、有機成分、激素，然后攪拌均勻，形成培養基初液，調節ph值至5.6，溫度維持在
50℃按照實際操作需要進行分裝，分裝后100℃滅菌30min備用；
步驟二：液體營養液的制備：液體營養液的配方按照固體培養基的配方，不添加激素、
瓊脂、花寶1號和香蕉蘋果提取液，所述液體營養液的生產流程包括：水加熱沸騰后，按照液
體營養液的配方加入各組分，混合定容后，調節ph值至5.4，溫度維持在50℃按照實際操作
需要進行分裝，分裝后100℃滅菌30min備用；
步驟三：霍山石斛果莢的選擇和消毒：選擇當年成熟保暖的霍山石斛果實，表面無病
斑、蟲斑，將采收的霍山石斛果莢進行手工清理，去除碩果表面枯萎的殘花，并用清水反復
沖洗，然后放入75％的酒精中至淹沒為止，浸泡50min，然后放在無菌的接種盤中在無菌操
作臺上晾干，備用；
步驟四：霍山石斛種子懸浮液的制備：無菌室超凈工作臺面上，用手術刀在果莢的尾部
切開一個小口子，用鑷子夾住果柄，將切口對準瓶口，用另一只鑷子輕輕敲打夾住果柄的鑷
子，將種子均勻的散落營養液中，并在無菌的環境下用磁力攪拌機懸浮液攪拌均勻，并用懸
浮計數法在顯微鏡下用計數板檢測種子在懸浮液的密度，達到80粒/ml的密度；
步驟五：無菌播種：在無菌操作臺上，用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml，放入
固體培養基中，蓋好瓶蓋緩慢晃動，直至瓶內的懸浮液均勻的平鋪在培養基表面為止，放入
培養框中，送至培養室培養；
步驟六：種苗培養，剛開始10天是種子萌發階段，采用暗培養，無光照，溫度控制在24
℃，10天-70天，為發芽階段，這一時間段內，保證光照時間7小時，光照強度2000lux，溫度控
制在28℃，70天-120天，為發側芽階段，這一時間段內，保證光照時間12小時，光照強度
1800lux，溫度控制在24℃，120天-180天，為壯苗階段，這一時間段內，保證光照時間9小時，
光照強度3000lux，溫度控制在24℃，180天-200天，為煉苗階段，這一時間段內，采用自然
光，光照強度為8000lux以下，溫度控制在32℃以下，在培養過程中，若發現固體培養基被種
苗吸收完不能夠滿足種苗繼續生長需要時，用無菌移液槍在無菌操作臺上將滅菌后的液體
營養液加至培養瓶中，供應種苗繼續生長。