本發明涉及一種提高埃博霉素B產率的生物合成方法，其步驟是采用離心法選出健壯的產埃博霉素B菌種接種于滅菌的種子培養基中，在30℃的搖床振蕩培養后再發酵；并向發酵培養基中添加前體誘導物苯丙氨酸；在30℃培養10～11天后收獲培養液；再經大孔樹脂收集吸附飽和，乙酸乙酯洗脫，分離純化、真空濃縮、萃取、低溫結晶、真空干燥。本發明將動態洗脫法用于埃博霉素B的工業化生產，使規?；a成為可能。通過液相制備柱可有效地提純埃博霉素B的純度，其純度可達99.5％以上，同時采用甲醇進行萃取分離，使埃博霉素B在甲醇中結晶，成品能達到醫藥級水平。本方法大幅度提高埃博霉素B產率達到30～45％，具有良好的工業化生產前景。

1.一種提高埃博霉素B產率的生物合成方法，其特征在于：包括如下步驟
：
⑴、生產出發菌種，Soce90—G15：通過3000rpm離心搖甁菌液選取生
長健壯的粘細菌作為生產出發菌種；
⑵、固體斜面擴培：培養基的組分按質量％計為，葡萄糖0.5～1％、
蛋白胨0.3～0.5％、淀粉0.5～1％、氯化鈉0.1～0.5％、赤霉素0.00
2％和瓊脂粉2％，余量為水；培養基在120℃、30分鐘滅菌冷卻后布置
成斜面，24小時后把生產出發菌種涂布于斜面上,在30±2℃、相對濕
度55％，7～9天可見生長豐滿、金黃色的菌苔，冷藏待用；
⑶、搖甁擴培：搖甁培養基為淀粉5～8g/L、酵母提取物2～4g/L、葡
萄糖0.5～1.5g/L、MgSO_4?1g/L、CaCl₂?1g/L、甘油0.5～1g/L、磷酸
二氫鈉0.05g/L、豆餅粉2～4g/L，飲用水1升，調PH為7.20、在120℃
、30分鐘滅菌；把固體斜面的菌苔輕輕刮下接入搖甁培養基，在29℃
±1℃、轉速150rpm下，生長5～6天；選取菌體生長健壯的搖甁菌種液
轉接入一級種子罐；
⑷、一級種子培養：一級種子培養基的組成與搖甁培養基相同，也在
120℃、30分鐘滅菌；把生長好的搖甁菌種液通過壓差法接入一級種子
罐中擴培，培養溫度29±2℃、轉速120rpm、空氣流量比1比0.4、罐壓
0.04㎏/㎝²，培養5～6天，將生長旺盛的菌種液轉接入二級種子罐；
⑸、二級種子罐培養：二級種子培養基的組成與搖甁培養基相同，也
在120℃、30分鐘滅菌；把生長好的一級菌種液通過壓差法接入二級種
子罐中擴培，培養溫度29±2℃、轉速120rpm、空氣流量比1比0.5、罐
壓0.04㎏/㎝²，培養2～3天，將生長旺盛的菌種液轉接入發酵罐；
⑹、發酵罐培養：發酵培養基的組成與搖甁培養基相同，但外加前體
誘導物0.2～0.5g/L、大孔吸附樹脂20g/L，所述在發酵培養基中外加
的前體誘導物為苯丙氨酸，或是它的有機鹽；PH調整至7.30，120℃、
30分鐘滅菌；把生長好的二級菌種液通過壓差法接入發酵罐中擴培，
培養產品的溫度29±2℃、轉速150rpm、空氣流量比1比0.8、罐壓0.0
4㎏/㎝²、培養10～11天；
⑺、洗滌、洗脫：發酵至殘糖低于0.2％，在代謝活性物質產出高點時
終止發酵，將發酵液中的的樹脂分離出來淘洗干凈裝入樹脂床內；用
50％甲醇洗滌1倍柱床量、流速
25ml/min，脫色、除雜；再用6倍柱床量乙酸乙酯，流速15ml/min洗脫
埃博霉素A、埃博霉素B活性物質，收集洗脫液；
⑻、真空濃縮：把收集的含活性物質的洗脫液真空濃縮，溫度40～45
℃、真空度﹣0.085～﹣0.095?MPa，濃縮至原始體積量的1/15以下；
⑼、液相制備柱分離：把濃縮液通過液相制備柱分離收集埃博霉素B部
份分離液；
⑽、萃取：把收集的含埃博霉素B分離液真空濃縮至剩余水相，加入有
機溶劑進行萃取分離收集有機相；
⑾、結晶：把收集的有機相真空濃縮，溫度40～45℃、真空度﹣0.08
5～﹣0.09MPa、濃縮至原始體積量的1/10以下；把濃縮液放入潔凈的
結晶器中﹣20℃低溫結晶；
⑿、真空干燥；收集結晶體放入潔凈的真空干燥箱,溫度45～50℃、真
空度?﹣0.085～﹣0.09MPa；干燥得到含量99.5％以上的活性產物埃
博霉素B成品。
2.根據權利要求1所述的一種提高埃博霉素B產率的生物合成方法，其特
征在于：所述的步驟⑶、⑷、⑸和⑹中的搖甁擴培采用搖甁振蕩培養
或攪拌沉沒培養方式。
3.根據權利要求1所述的一種提高埃博霉素B產率的生物合成方法，其特
征在于：所述在發酵培養基中外加前體誘導物加入培養基的方法為一
次投入或是間歇流加。