1.一種戰骨的組織培養方法,包括誘導培養、增殖培養、壯苗培養和生
根培養,其中,以帶腋芽的莖段作為外植體,所述誘導培養、增殖培養、壯
苗培養和生根培養在固體培養基中進行;所述誘導培養中的固體培養基的組
成為:MS,30g·L-1蔗糖,1.0mg·L-16-芐基腺嘌呤,0.2mg·L-1萘乙酸和3.5g·L-1
瓊脂,并調節初始pH值為5.8;所述增殖培養中的固體培養基的組成為:MS,
30g·L-1蔗糖,1.0g·L-1活性炭,1.0-2.0mg·L-16-芐基腺嘌呤,0.1-1.0mg·L-1
萘乙酸,0.3-0.5mg·L-1吲哚乙酸和3.5g·L-1瓊脂,并調節初始pH值為5.8;
所述壯苗培養中的固體培養基的組成為:MS,30g·L-1蔗糖,1.0g·L-1活性炭,
0.5-1.5mg·L-16-芐基腺嘌呤,0.1-2mg·L-1的萘乙酸和3.5g·L-1瓊脂,并調節
初始pH值為5.8;所述生根培養中的固體培養基的組成為:1/2MS,30g·L-1
蔗糖,1.0g·L-1活性炭,0.3-0.5mg·L-1生根粉,1.0-2.0mg·L-1萘乙酸和3.5g·L-1
瓊脂,并調節初始pH值為5.8;在所述誘導培養中的固體培養基、所述增殖
培養中的固體培養基、所述壯苗培養中的固體培養基和所述生根培養中的固
體培養基中均放入明膠海綿,所述明膠海綿為邊長0.5cm的立方體,每升所
述誘導培養中的固體培養基、所述增殖培養中的固體培養基、所述壯苗培養
中的固體培養基和所述生根培養中的固體培養基中均放置有100-120個所述
明膠海綿,當所述誘導培養中的固體培養基、所述增殖培養中的固體培養基、
所述壯苗培養中的固體培養基和所述生根培養中的固體培養基凝固時,所述
明膠海綿全部均勻浸入所述誘導培養中的固體培養基、所述增殖培養中的固
體培養基、所述壯苗培養中的固體培養基和所述生根培養中的固體培養基中。
2.如權利要求1所述的戰骨的組織培養方法,其中,所述誘導培養中,
將外植體在溫度為24-26℃,光照強度為1500lux,及光照時間為10-12h/d
的條件下培養20d,誘導不定芽萌發,以得到無菌試管苗。
3.如權利要求1所述的戰骨的組織培養方法,其中,在所述誘導培養之
后進行所述增殖培養,將經過所述誘導培養得到的無菌試管苗在溫度為
24-26℃,光照強度為1500lux,及光照時間為10-12h/d的條件下培養30d,
得到大量不定芽。
4.如權利要求1所述的戰骨的組織培養方法,其中,在所述增殖培養之
后進行所述壯苗培養,將經過所述增殖培養得到的不定芽在溫度為24-26℃,
光照強度為1500lux,及光照時間為10-12h/d的條件下培養30d,得到健壯
植株。
5.如權利要求1-4任一項所述的戰骨的組織培養方法,其中,在所述壯
苗培養之后進行所述生根培養,將經過所述壯苗培養得到的健壯植株在溫度
為24-26℃,光照強度為1500lux,及光照時間為10-12h/d的條件下培養30d,
得到帶根苗。
6.如權利要求1所述的戰骨的組織培養方法,在所述誘導培養之前還包
括獲得無菌外植體的步驟,其中,所述獲得無菌外植體的步驟為:
步驟一、取帶腋芽的莖段作為外植體,放置于燒杯中,加入質量分數為
0.05%-0.1%的洗潔精水溶液浸泡5-10min,浸泡過程中用毛筆輕輕洗刷所述外
植體表面污垢,取出所述外植體后用流水沖洗15-20min,移至超凈工作臺;
步驟二、將所述步驟一中處理后的外植體在體積分數為70%-75%的酒精
中浸泡10-20秒,然后將所述外植體在含有重量份數為0.01-0.1份的表面活性
劑、0.1-1.0份的抗菌肽和70-100份的無菌水的混合溶液中浸泡10-20min,再
利用低溫等離子體處理浸泡在所述混合溶液中的外植體1-5min,取出所述外
植體后用無菌水沖洗3-5次,一次2-5min,最后用無菌吸水紙吸干所述外植
體表面水分,切成0.5-0.8cm的帶一個腋芽的莖段,得到無菌外植體。
7.如權利要求6所述的戰骨的組織培養方法,其中,所述步驟二中所述
表面活性劑為吐溫-20、蔗糖酯和十六烷基三甲基氯化銨中的任意一種或幾
種。
8.如權利要求6所述的戰骨的組織培養方法,其中,所述步驟二中利用
所述低溫等離子體處理所述外植體的步驟為:將大氣壓低溫等離子體裝置的
噴嘴沒入所述混合溶液液面以下,在所述大氣壓低溫等離子體裝置內通入氧
氣和氦氣質量比為1:20的混合氣體,然后打開放電裝置,放電處理1-5min
讓所述大氣壓低溫等離子體裝置產生的低溫等離子體與水接觸,對所述混合
溶液中的外植體進行殺菌處理。
9.如權利要求1所述的戰骨的組織培養方法,在所述生根培養之后還包
括煉苗移栽的步驟,其中,所述煉苗移栽的步驟為:
步驟(1)、在溫度23-25℃下,向所述生根培養的固體培養基中加入水使
所述生根培養的固體培養基全部位于水中,并繼續培養3-5d;以及,
步驟(2)、洗凈所述步驟(1)中處理后的試管苗的根部培養基,移栽到
泥炭土與細河沙質量比為3:1的混合基質中培養30-40d,再移栽至大田。
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